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人T淋巴細胞白血病細胞Jurkat（clone E6-1）介紹

這是Jurkat-FHCRC細胞株(Jurkat細胞株的衍生)的一個克隆,。 Jurkat細胞株來源于一個14歲男孩的外周血,。 經(jīng)佛波酯和外源凝集素或抗T3單克隆抗體(兩種類型的誘導(dǎo)都需要)誘導(dǎo)后可產(chǎn)生大量IL-2。

人T淋巴細胞白血病細胞Jurkat（clone E6-1）特性

1） 來源：T淋巴細胞,；急性T細胞白血病

2） 形態(tài)：淋巴母細胞,懸浮生長

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體,、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細胞方式

（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇,；

（2）存活細胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,，再進行凍存,。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

（3）收到細胞后請拍照,，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,，請及時拍照與我們聯(lián)系。

細胞用途：僅供科研使用,。

Jurkat 人T淋巴細胞白血病細胞/STR鑒定接收后的處理：

1） 收到細胞后,，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細胞有污染,，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時,，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行,，能準確判斷細胞的傳代密度,。看細胞的形態(tài)請在10X和20×物鏡下,，同時給剛收到的細胞拍照,，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù),。

3） 觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,。

4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象,，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。

5） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基）。

6）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。  收到細胞后di一次傳代建議1：2傳代 。                    

培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備RPMI-1640（推薦：iCell-0002）培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%； GlutaMAX （Gibco,，35050061）,，1%；雙抗,，1%,。

參考傳代周期：不超過300萬細胞/ mL，建議將活細胞密度控制在10萬-100萬/ mL之間

參考傳代密度：10萬活細胞/ mL,參考換液頻率：2-3天,。

2） 注意

a）該細胞為懸浮細胞,，根據(jù)培養(yǎng)經(jīng)驗以及客戶的反饋，傳代時使用【半換液法】對細胞狀態(tài)有利,，因此我?guī)旖ㄗh您使用【半換液法】進行傳代,。同時，您在收到細胞后,，請不要通過離心的方式收集細胞,，可以直接向培養(yǎng)瓶中添加等體積的新鮮培養(yǎng)液，然后將細胞吹打均勻后移入兩個新的T25培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)即可,。

b）改細胞對血清質(zhì)量較為敏感,，我?guī)旖ㄗh您使用進口*優(yōu)質(zhì)血清進行培養(yǎng),。

c）該細胞對細胞密度較為敏感，培養(yǎng),，傳代時請注意保持細胞密度在合適的范圍。

3） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

4） 凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?50px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）補加到6ml,。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

1. 收到細胞后*傳代推薦將細胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,，建議凍存一支備用,，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2到1:5的比例進行。換液可通過添加幾毫升新鮮培養(yǎng)基或離心之后去上清液,，添加新培養(yǎng)基重懸培養(yǎng),。

2） 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。

下面T25瓶為類,；

1，細胞凍存時,，取上清,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2,，4min ,，1000rpm 離心去掉上清,。加1ml血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和DMSO,，輕輕混勻,，DMSO終濃度為10%，細胞密度1-2xE6/ml,，每支凍存管凍存1ml細胞懸液,，注意凍存管做好標識。

3,，將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

鏡像綺點（上海）細胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)：

一、原代細胞服務(wù)
      各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源,；
      多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源,；
      原代細胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑、kit,、培養(yǎng)基添加劑等,；
      原代細胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)和整體實驗外包服務(wù)；

二,、細胞株/系服務(wù)
      細胞株/系培養(yǎng),、增殖、凍存和相關(guān)說明書,；
      細胞系培養(yǎng)過程的技術(shù)指導(dǎo),；
      細胞系培養(yǎng)基、添加劑,、血清及相關(guān)生長因子,、試劑等；

三,、iPS細胞
      iPS細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層在）,；
      iPS細胞增殖及冷凍保存；
      iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實習,；
      新藥及實驗儀器上市前評估,；

四、技術(shù)外包服務(wù)：各類細胞生物學實驗,、分子生物學實驗,、顯微鏡拍照服務(wù)等

五、其他：根據(jù)客戶需要定制服務(wù)等