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人神經(jīng)上皮瘤細胞/STR鑒定介紹

這株細胞與HTB-11都是神經(jīng)源的。1971年9月分離得到SK-N-MC后,，發(fā)現(xiàn)它有中性多巴胺-β-羥化酶活性,，也有細胞內(nèi)兒茶酚胺，用甲醛可以誘導出熒光,。

細胞特性

1） 來源：腦,；眼眶上區(qū)神經(jīng)上皮瘤轉(zhuǎn)移灶

2） 形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長

3） 含量：>1x106

4） 污染：支原體、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式

（1）干冰運輸,，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇；

（2）存活細胞,，收到后應繼續(xù)生長,，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存,。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟,。

（3）收到細胞后請拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,，請及時拍照與我們聯(lián)系,。

細胞用途：僅供科研使用。

人神經(jīng)上皮瘤細胞/STR鑒定接收后的處理：

1） 收到細胞后,，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細胞有污染,，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時,，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行,，能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20×物鏡下,，同時給剛收到的細胞拍照，（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3） 觀察好細胞狀態(tài)后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,。

4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長,，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）,。

5） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基）,。

6）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后di一次傳代建議1：2傳代 。

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備MEM（推薦iCell-0012）培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%；雙抗,，1%,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?50px皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度,。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

注：di一次傳代推薦傳代比例為1:2,，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。

下面T25瓶為類；

1,，細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1mlyi酶,，細胞變圓脫落后,，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。

2,，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞,，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和DMSO,，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%,，細胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識,。

3，將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱,，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

鏡像綺點（上海）細胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和技術(shù)服務：

一,、原代細胞服務
      各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源；
      多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源,；
      原代細胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑,、kit、培養(yǎng)基添加劑等,；
      原代細胞相關(guān)技術(shù)服務和整體實驗外包服務,；

二、細胞株/系服務
      細胞株/系培養(yǎng),、增殖,、凍存和相關(guān)說明書,；
      細胞系培養(yǎng)過程的技術(shù)指導；
      細胞系培養(yǎng)基,、添加劑,、血清及相關(guān)生長因子、試劑等,；

三,、iPS細胞
      iPS細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層在）；
      iPS細胞增殖及冷凍保存,；
      iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實習,；
      新藥及實驗儀器上市前評估；

四,、技術(shù)外包服務：各類細胞生物學實驗,、分子生物學實驗、顯微鏡拍照服務等

五,、其他：根據(jù)客戶需要定制服務等