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LN-229 人膠質(zhì)瘤細(xì)胞/STR鑒定介紹

該細(xì)胞建系于1979年，細(xì)胞來(lái)源于一個(gè)右額頂枕葉膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者,。細(xì)胞顯示p53突變,，同時(shí)在p16及p14ARF 腫瘤抑制基因可能存在缺失。他們均含有野生型PTEN 基因,。

細(xì)胞特性

1） 來(lái)源：膠質(zhì)母細(xì)胞瘤

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣,，貼壁生長(zhǎng)

3） 含量：>1x106 個(gè)/mL

4） 污染：支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式

（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇,；

（2）存活細(xì)胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，再進(jìn)行凍存,。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

（3）收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照,，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,，請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。

LN-229 人膠質(zhì)瘤細(xì)胞/STR鑒定用途：僅供科研使用,。

細(xì)胞接收后的處理：

1） 收到細(xì)胞后,，請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們,。

2） 在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行,，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度,。看細(xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X和20×物鏡下,，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照,，（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3） 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。

4） 貼壁細(xì)胞：在運(yùn)輸過(guò)程中貼壁細(xì)胞會(huì)有脫落的現(xiàn)象,，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落或者脫落后抱團(tuán)生長(zhǎng),，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到加有按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）,。

5） 懸浮細(xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基）,。

6）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,。  收到細(xì)胞后di一次傳代建議1：2傳代 ,。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備DMEM（推薦iCell-0001）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,；雙抗，1%,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過(guò)夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注：di一次傳代推薦傳代比例為1:2,，以后傳代比例可根據(jù)客戶(hù)需要自己決定,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。

下面T25瓶為例,；

1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后,，PBS清洗瓶底1-2次后加入1mlyi酶，細(xì)胞變圓脫落后,，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2．1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,，加DMSO至終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,，注意凍存管做好標(biāo)識(shí),。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。

3．將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱,，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

鏡像綺點(diǎn)（上海）細(xì)胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)：

一,、原代細(xì)胞服務(wù)
      各類(lèi)模式哺乳動(dòng)物的多種原代細(xì)胞資源；
      多種人源性正常及腫瘤原代細(xì)胞資源,；
      原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑,、kit、培養(yǎng)基添加劑等,；
      原代細(xì)胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)和整體實(shí)驗(yàn)外包服務(wù),；

二、細(xì)胞株/系服務(wù)
      細(xì)胞株/系培養(yǎng),、增殖,、凍存和相關(guān)說(shuō)明書(shū)；
      細(xì)胞系培養(yǎng)過(guò)程的技術(shù)指導(dǎo),；
      細(xì)胞系培養(yǎng)基,、添加劑、血清及相關(guān)生長(zhǎng)因子,、試劑等,；

三、iPS細(xì)胞
      iPS細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無(wú)滋養(yǎng)層在）,；
      iPS細(xì)胞增殖及冷凍保存,；
      iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實(shí)習(xí)；
      新藥及實(shí)驗(yàn)儀器上市前評(píng)估,；

四,、技術(shù)外包服務(wù)：各類(lèi)細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),、顯微鏡拍照服務(wù)等

五,、其他：根據(jù)客戶(hù)需要定制服務(wù)等