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　　人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231介紹

　　該細(xì)胞系由CailleauR在1976年從一名48歲的患有轉(zhuǎn)移性乳腺癌的白人女性的心包滲出液中分離建立的。該細(xì)胞表達(dá)FGF的受體,。

　　細(xì)胞特性

　　（1）來源：乳腺癌

　?。?）形態(tài)：上皮細(xì)胞樣,，貼壁生長

　　（3）含量：>1x106個/mL

　?。?）污染：支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

　?。?）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

　　人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231運(yùn)輸和保存

　　可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式

　?。?）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇,；

　　（2）存活細(xì)胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長,，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，再進(jìn)行凍存,。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

　?。?）收到細(xì)胞后請拍照,，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,，請及時拍照與我們聯(lián)系。

　　MDA-MB-453人乳腺癌細(xì)胞/STR鑒定用途：僅供科研使用,。

　　細(xì)胞接受后的處理：

　?。?）收到細(xì)胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們,。

　?。?）在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)時，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行,，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度,。看細(xì)胞的形態(tài)請在10X和20×物鏡下,，同時給細(xì)胞拍照各2-3張（10×,，20×都要拍照）,，作為售后的依據(jù)。

　?。?）觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。

　?。?）貼壁細(xì)胞：在運(yùn)輸過程中貼壁細(xì)胞會有脫落的現(xiàn)象,，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落或者脫落后抱團(tuán)生長，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。

　?。?）懸浮細(xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基）,。

　?。?）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。收到細(xì)胞后di一次傳代建議1：2傳代,。

　　細(xì)胞培養(yǎng)步驟

　　一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

　　（1）準(zhǔn)備L15（推薦iCell-0009）培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,；雙抗,，1%,。

　　（2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，100%,。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

　?。?）凍存液：90%血清，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

　　二．細(xì)胞處理：

　　（1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

　?。?）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

　　對于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

　　1,、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。

　　2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。

　　3,、按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

　　4,、將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

　　注：di一次傳代推薦傳代比例為1:2,，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定,。

　　（3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。

　　下面T25瓶為類；

　　1,、細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后,，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

　　2,、4min1000rpm離心去掉上清,。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO,，輕輕混勻,，DMSO終濃度為10%,，細(xì)胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識,。

　　3、將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱,，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

　　鏡像綺點(diǎn)（上海）細(xì)胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和服務(wù)介紹：

　　一,、原代細(xì)胞服務(wù)：

　　各類模式哺乳動物的多種原代細(xì)胞資源

　　多種人源性正常及腫瘤原代細(xì)胞資源

　　原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑,、kit,、培養(yǎng)基添加劑等

　　原代細(xì)胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)及整體實(shí)驗外包服務(wù)

　　二,、細(xì)胞系服務(wù)：

　　細(xì)胞株/系培養(yǎng)、增殖,、凍存和相關(guān)說明書

　　細(xì)胞系培養(yǎng)過程的技術(shù)指導(dǎo)

　　細(xì)胞系培養(yǎng)基,、添加劑、血清及相關(guān)生長因子,、試劑等

　　三,、iPS細(xì)胞服務(wù)：

　　iPS細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層）

　　iPS細(xì)胞增殖及冷凍保存

　　iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實(shí)習(xí)

　　新藥及實(shí)驗儀器上市前評估

　　四、其他技術(shù)外包服務(wù),、客戶定制服務(wù)等

　　鏡像綺點(diǎn)（上海）細(xì)胞技術(shù)有限公司