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NRK-52E 大鼠腎細(xì)胞/鏡像綺點(diǎn)（iCell）特性

1） 來(lái)源：大鼠,，正常腎

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)

3） 含量：>1x106 個(gè)/mL

4） 污染：支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：

（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇,；

（2）存活細(xì)胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng),，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存,。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。

（3）收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,，請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系,。

NRK-52E 大鼠腎細(xì)胞/鏡像綺點(diǎn)（iCell）接受后的處理：

1） 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液,，如果漏液,，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。

2） 請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h,。

3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的*培養(yǎng)基,。

4） 如果細(xì)胞長(zhǎng)滿（90%以上）請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代,。

5） 接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染,，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。

細(xì)胞用途：僅供科研使用,。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程,，供參考

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；小牛血清,，10%,；添加10ng/ml EGF；雙抗,，1%,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37℃,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

對(duì)于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化,。

3. 輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),。

注：*次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定,。

3） 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),，先要消化處理并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),。消化方法按照細(xì)胞傳代方法的1-3步驟進(jìn)行，后的重懸液使用血清,。懸浮細(xì)胞直接計(jì)數(shù)后離心,，用血清重懸浮,，加DMSO至終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存,。

下面T25瓶為例；

1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后,，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。

2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,，加DMSO至終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,，注意凍存管做好標(biāo)識(shí),。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。

3．將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱,，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

鏡像綺點(diǎn)（上海）細(xì)胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和服務(wù)介紹：

        一,、原代細(xì)胞服務(wù)：
               各類(lèi)模式哺乳動(dòng)物的多種原代細(xì)胞資源
               多種人源性正常及腫瘤原代細(xì)胞資源
               原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑、kit,、培養(yǎng)基添加劑等
               原代細(xì)胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)及整體實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)

        二,、細(xì)胞系服務(wù)：
               細(xì)胞株/系培養(yǎng)、增殖,、凍存和相關(guān)說(shuō)明書(shū)
               細(xì)胞系培養(yǎng)過(guò)程的技術(shù)指導(dǎo)
               細(xì)胞系培養(yǎng)基,、添加劑、血清及相關(guān)生長(zhǎng)因子,、試劑等

        三,、iPS細(xì)胞服務(wù)：
               iPS細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無(wú)滋養(yǎng)層）
               iPS細(xì)胞增殖及冷凍保存
               iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實(shí)習(xí)
               新藥及實(shí)驗(yàn)儀器上市前評(píng)估

        四、其他技術(shù)外包服務(wù),、客戶定制服務(wù)等

鏡像綺點(diǎn)（上海）細(xì)胞技術(shù)有限公司