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IEC-6 BHS 大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞/鏡像綺點(diǎn)（iCell）介紹

皮質(zhì)醇可抑制該細(xì)胞的生長。該細(xì)胞表達(dá)腸上皮*抗原,，在20代以前保持恒定的生長速度和細(xì)胞形態(tài),，此后生長速度迅速下降，細(xì)胞形態(tài)也發(fā)生改變,。

細(xì)胞特性

1） 來源：大鼠小腸

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式

（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇,；

（2）存活細(xì)胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，再進(jìn)行凍存,。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

（3）收到細(xì)胞后請拍照,，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,，請及時拍照與我們聯(lián)系。

細(xì)胞用途：僅供科研使用,。

IEC-6 BHS 大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞/鏡像綺點(diǎn)（iCell）接受后的處理：

1） 收到細(xì)胞后,，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細(xì)胞有污染,，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2） 在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)時,，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行,，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請?jiān)?0X和20×物鏡下,，同時給細(xì)胞拍照各2-3張（10×，20×都要拍照）,，作為售后的依據(jù),。

3） 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,。

4） 貼壁細(xì)胞：在運(yùn)輸過程中貼壁細(xì)胞會有脫落的現(xiàn)象,，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落或者脫落后抱團(tuán)生長,，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）,。

5） 懸浮細(xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基）,。

6）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。  收到細(xì)胞后*次傳代建議1：2傳代 ,。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備DMEM（推薦iCell-0001）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,，添加0.1u/mL胰島素；雙抗,，1%,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

注：*次傳代推薦傳代比例為1:2,，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。

下面T25瓶為例,；

1．細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后,，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。

2．1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識,。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存,。

3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱,，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。

鏡像綺點(diǎn)（上海）細(xì)胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和服務(wù)介紹：

        一,、原代細(xì)胞服務(wù)：
               各類模式哺乳動物的多種原代細(xì)胞資源
               多種人源性正常及腫瘤原代細(xì)胞資源
               原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑,、kit、培養(yǎng)基添加劑等
               原代細(xì)胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)及整體實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)

        二,、細(xì)胞系服務(wù)：
               細(xì)胞株/系培養(yǎng),、增殖,、凍存和相關(guān)說明書
               細(xì)胞系培養(yǎng)過程的技術(shù)指導(dǎo)
               細(xì)胞系培養(yǎng)基、添加劑,、血清及相關(guān)生長因子,、試劑等

        三、iPS細(xì)胞服務(wù)：
               iPS細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層）
               iPS細(xì)胞增殖及冷凍保存
               iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實(shí)習(xí)
               新藥及實(shí)驗(yàn)儀器上市前評估

        四,、其他技術(shù)外包服務(wù),、客戶定制服務(wù)等

鏡像綺點(diǎn)（上海）細(xì)胞技術(shù)有限公司