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V79 倉鼠肺細胞/鏡像綺點（iCell）介紹

該細胞系由D.J.Griad通過肺癌組織移植培養(yǎng)建系,，患者為58歲白人男性,。A549能通過胞苷二磷酸膽堿途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的卵磷脂,。

細胞特性

1） 來源：倉鼠

2） 形態(tài)：成纖維細胞樣,；貼壁生長

3） 含量：>1x106

4） 污染：支原體,、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式

（1）干冰運輸,，收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇,；

（2）存活細胞，收到后應繼續(xù)生長,，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,，再進行凍存,。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

（3）收到細胞后請拍照,，3天內如果發(fā)現污染,，請及時拍照與我們聯(lián)系。

V79 倉鼠肺細胞/鏡像綺點（iCell）接受后的處理：

1） 收到細胞后,，請檢查是否漏液,，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們,。

2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài),，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,，添加6ml新的的*培養(yǎng)基,。

4） 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代。

5） 接到細胞次日,，請檢查細胞是否污染,，若發(fā)現污染或疑似污染，請及時與我們取得聯(lián)系,。

細胞用途：僅供科研使用,。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備RPMI-1640培養(yǎng)基,；優(yōu)質胎牛血清,，20%；雙抗,，1%,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37℃,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO,，現用現配,。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細胞的培養(yǎng)基終止消化。

3. 輕輕吹打后吸出,，移入15ml離心管中,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4 . 收到細胞后*傳代推薦將細胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，建議凍存一支備用,，后續(xù)傳代根據實際情況按1:2到1:5的比例進行,。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。

下面T25瓶為類,；

1，細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后,，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數板計數。

2,，4min 1000rpm 離心去掉上清,。加1ml血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO,，輕輕混勻,，DMSO終濃度為10%，細胞密度不低于1x10E6/ml,，每支凍存管凍存1ml細胞懸液,，注意凍存管做好標識,。

3，將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱,，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

鏡像綺點（上海）細胞技術有限公司主要產品和服務介紹：

        一,、原代細胞服務：
               各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源
               多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源
               原代細胞分離和培養(yǎng)相關試劑、kit,、培養(yǎng)基添加劑等
               原代細胞相關技術服務及整體實驗外包服務

        二,、細胞系服務：
               細胞株/系培養(yǎng)、增殖,、凍存和相關說明書
               細胞系培養(yǎng)過程的技術指導
               細胞系培養(yǎng)基,、添加劑、血清及相關生長因子,、試劑等

        三,、iPS細胞服務：
               iPS細胞基礎培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層）
               iPS細胞增殖及冷凍保存
               iPS基礎培養(yǎng)技術實習
               新藥及實驗儀器上市前評估

        四、其他技術外包服務,、客戶定制服務等

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