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CHO 倉鼠卵巢細胞/鏡像綺點（iCell）介紹

1957年從成年倉鼠的活組織切片中建立,。

細胞特性

1） 來源：倉鼠卵巢

2） 形態(tài)：成纖維細胞樣,，貼壁生長

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體,、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：

（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇,；

（2）存活細胞,，收到后應繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,，再進行凍存,。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

（3）收到細胞后請拍照,，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,，請及時拍照與我們聯(lián)系。

細胞用途：僅供科研使用,。

細胞接受后的處理：

1） 收到細胞后,，請檢查是否漏液，如果漏液,，請拍照片發(fā)給我們,。

2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h,。

3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,，添加6ml新的*培養(yǎng)基。

4） 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代,。

5） 接到細胞次日,，請檢查細胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系,。

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備DMEM培養(yǎng)基,；北美胎牛血清，10%,；雙抗1%,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． CHO 倉鼠卵巢細胞/鏡像綺點（iCell）處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?50px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 收到細胞后*傳代推薦將細胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,，建議凍存一支備用，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2到1:5的比例進行,。

細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。

下面T25瓶為例,；

1．細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1mlyi酶,，細胞變圓脫落后,，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。

2．1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識,。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存,。

3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱,，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。

鏡像綺點（上海）細胞技術有限公司主要產(chǎn)品和服務介紹：

       一,、原代細胞服務：
              各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源
              多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源
              原代細胞分離和培養(yǎng)相關試劑,、kit、培養(yǎng)基添加劑等
              原代細胞相關技術服務及整體實驗外包服務

       二,、細胞系服務：
              細胞株/系培養(yǎng),、增殖、凍存和相關說明書
              細胞系培養(yǎng)過程的技術指導
              細胞系培養(yǎng)基,、添加劑,、血清及相關生長因子、試劑等

       三,、iPS細胞服務：
              iPS細胞基礎培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層）
              iPS細胞增殖及冷凍保存
              iPS基礎培養(yǎng)技術實習
              新藥及實驗儀器上市前評估

       四,、其他技術外包服務、客戶定制服務等

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