人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y/STR鑒定介紹
SH-SY5Y是1970年建自骨瘤轉(zhuǎn)移灶的神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH細(xì)胞系經(jīng)三次克隆后的亞系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y),。該細(xì)胞顯示中等水平的多巴胺-β-羥基酶活性。SH-SY5Y細(xì)胞的飽和密度大于1X106細(xì)胞/cm2,。
人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y/STR鑒定特性
(1）來源：腦神經(jīng)母細(xì)胞瘤,，轉(zhuǎn)移部位骨髓
(2）形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，半貼壁生長
(3）含量：>1x106個(gè)/mL
(4）污染：支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌檢測為陰性
(5）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
運(yùn)輸和保存
可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：
（1）干冰運(yùn)輸,，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇,；
（2）存活細(xì)胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長,，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存,。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。
?。?）收到細(xì)胞后請拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,，請及時(shí)拍照與我們聯(lián)系,。
SH-SY5Y人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞/STR鑒定/鏡像綺點(diǎn)（iCell）用途：僅供科研使用。
細(xì)胞接收后的處理：
(1）收到細(xì)胞后,，請檢查是否漏液,，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們,。
(2）請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài),，酒精消毒瓶壁并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
(3）T25瓶中的培養(yǎng)基取出離心后,，去上清,，添加6ml新的*培養(yǎng)基，重新加入原T25培養(yǎng)瓶,。
(4）如果細(xì)胞長滿90%請及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代,，傳代培養(yǎng)用本公司附帶的*培養(yǎng)基。
(5）接到細(xì)胞次日,，請檢查細(xì)胞是否污染,，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系,。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
(1）準(zhǔn)備MEM/F-12（1：1）培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%,；雙抗,，1%。
(2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
(3）凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
(1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。
(2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1,、將上清取出,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。
2,、加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量*培養(yǎng)基終止消化,。
3、輕輕打勻后吸出,，和上清一起在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4,、將細(xì)胞懸液按1：2到1:5比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注：次傳代推薦傳代比例為1:2,，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定,。
(3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。
下面T25瓶為類,；
1、細(xì)胞凍存時(shí),，取出上清,，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后,，加入1ml*培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2,、4min1000rpm離心去掉上清,。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO,，輕輕混勻,，DMSO終濃度為10%,，細(xì)胞密度1-2xE6/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液,，注意凍存管做好標(biāo)識(shí),。
3、將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱,，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
鏡像綺點(diǎn)（上海）細(xì)胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和服務(wù)介紹：
一,、原代細(xì)胞服務(wù)：
各類模式哺乳動(dòng)物的多種原代細(xì)胞資源
多種人源性正常及腫瘤原代細(xì)胞資源
原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑、kit,、培養(yǎng)基添加劑等
原代細(xì)胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)及整體實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)
二,、細(xì)胞系服務(wù)：
細(xì)胞株/系培養(yǎng)、增殖,、凍存和相關(guān)說明書
細(xì)胞系培養(yǎng)過程的技術(shù)指導(dǎo)
細(xì)胞系培養(yǎng)基,、添加劑、血清及相關(guān)生長因子,、試劑等
三,、iPS細(xì)胞服務(wù)：
iPS細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層）
iPS細(xì)胞增殖及冷凍保存
iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實(shí)習(xí)
新藥及實(shí)驗(yàn)儀器上市前評(píng)估
四、其他技術(shù)外包服務(wù),、客戶定制服務(wù)等
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