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THP-1人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞/STR鑒定

細(xì)胞介紹

該細(xì)胞對(duì)乳汁珠和激活的紅細(xì)胞有吞噬作用,，無表面和胞質(zhì)免疫球蛋白,。可以用佛波醇 TPA誘導(dǎo)單核細(xì)胞分化,。

細(xì)胞特性

1） 來源：急性單核細(xì)胞白血病,，單核細(xì)胞

2） 形態(tài)：?jiǎn)魏思?xì)胞，懸浮

3） 含量：>1x106 細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶（15ml離心管）或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用,。

運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系,。

（2）復(fù)蘇的存活細(xì)胞15mL離心管常溫發(fā)貨,，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理

1） 收到細(xì)胞后請(qǐng)勿拆除封口膜,，75%酒精消毒擦拭瓶壁將15mL離心管置于37℃培養(yǎng)箱放置約1-2h,，若發(fā)現(xiàn)離心管破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們,。

2）請(qǐng)?jiān)诩?xì)胞移入2個(gè)新的T25培養(yǎng)瓶后，在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),，同時(shí)給剛移入培養(yǎng)瓶的細(xì)胞拍照（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù),。

THP-1人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞/STR鑒定

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

1） 準(zhǔn)備RPMI-1640（推薦iCell-0002）培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%,；0.05 mM β－巰基乙醇(細(xì)胞培養(yǎng)級(jí) 推薦：iCell-8211),；雙抗，1%,。

2） 參考傳代比例：傳代時(shí)控制細(xì)胞密度在2-4 ×105cell / mL,，并在細(xì)胞生長(zhǎng)至8-10 ×105cell / mL時(shí)進(jìn)行傳代。

3） 參考換液頻率：傳代時(shí)換液

4） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

5） 凍存液：完quan培養(yǎng)液95%，DMSO 5%（使用該凍存液后,，按照我?guī)斓慕?jīng)驗(yàn)復(fù)蘇存活率約50%,，復(fù)蘇后需要額外培養(yǎng)7-10天才能恢復(fù)生長(zhǎng)）

6） 【注意事項(xiàng)】：

該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，根據(jù)培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)以及客戶的反饋,，傳代時(shí)使用【半換液法】對(duì)細(xì)胞狀態(tài)較為有利,，因此我?guī)旖ㄗh您使用【半換液法】進(jìn)行傳代。

1. 您在收到我們提供的用15mL離心管（充液為完quan培養(yǎng)基）發(fā)貨的細(xì)胞后,，請(qǐng)不要通過離心的方式收集細(xì)胞,，可以先準(zhǔn)備兩個(gè)新的T25培養(yǎng)瓶，然后將細(xì)胞混合均勻后移入兩個(gè)新的T25培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加培養(yǎng)基到10ml,。放入到37℃培養(yǎng)箱中。

2. thp-1懸浮細(xì)胞,。該細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)更喜歡溫和處理,，培養(yǎng)時(shí)盡量少對(duì)細(xì)胞進(jìn)行離心處理以此造成對(duì)細(xì)胞的傷害。換液時(shí)不要全培養(yǎng)基更換,，建議您使用【半換液法】進(jìn)行傳代,，添加細(xì)胞培養(yǎng)基以稀釋細(xì)胞至維持密度即可。

3.  細(xì)胞對(duì)血清質(zhì)量較為敏感,，我?guī)旖ㄗh您使用進(jìn)口大品pai優(yōu)質(zhì)血清進(jìn)行培養(yǎng),。FBS不要滅活，如果細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢請(qǐng)嘗試使用其他FBS或暫時(shí)將FBS濃度增加到20%

4.  該細(xì)胞的培養(yǎng)液中需添加β-巰基乙醇（細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)別）,，若不添加,，可能會(huì)對(duì)細(xì)胞狀態(tài)造成影響。

β-巰基乙醇的穩(wěn)定性有限,，不可將β-巰基乙醇添加到完quan培養(yǎng)基中長(zhǎng)期儲(chǔ)存,，在每次傳代或液體添加時(shí)再添加β-巰基乙醇。

β-巰基乙醇（2-qiu基乙醇）被添加到淋巴細(xì)胞或其他細(xì)胞培養(yǎng)物中,，因?yàn)樵谂囵B(yǎng)基中使用的FBS中氨基酸半胱an酸供不應(yīng)求,，而胱an酸則很多。有些細(xì)胞（例如T細(xì)胞）無法將半胱an酸轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞質(zhì)中,，必須將其轉(zhuǎn)化為半胱an酸,。β-巰基乙醇將胱an酸還原為可被細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)的形式，然后轉(zhuǎn)化為細(xì)胞生長(zhǎng)所需的半胱an酸,。  β-巰基乙醇還是一種還原劑,，可以分解培養(yǎng)中細(xì)胞產(chǎn)生的許多有毒代謝產(chǎn)物，從而改善細(xì)胞周圍的環(huán)境,。

5.  該細(xì)胞對(duì)細(xì)胞密度較為敏感,，培養(yǎng)、傳代時(shí)請(qǐng)注意保持細(xì)胞密度在合適的范圍（具體請(qǐng)參考細(xì)胞說明書）,。

6 . 該細(xì)胞凍存后復(fù)蘇率較低,，凍存時(shí)請(qǐng)酌情提高細(xì)胞量。

7 .通常情況下可以通過向正在生長(zhǎng)的細(xì)胞中添加完quan培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長(zhǎng),，每7天可以將細(xì)胞離心并重懸于新配的培養(yǎng)基中,，來完成細(xì)胞的全換液。

ATCC有關(guān)thp-1細(xì)胞保持細(xì)胞活力的說明

（頻繁的細(xì)胞計(jì)數(shù)是監(jiān)測(cè)thp-1的最佳方法,。這些細(xì)胞應(yīng)該每2至3天通過向燒瓶中簡(jiǎn)單加入少量新鮮培養(yǎng)基（使它們具有條件培養(yǎng)基）來培養(yǎng),。您不需要每次都離心細(xì)胞并重新傳代。當(dāng)在我們的實(shí)驗(yàn)室中培養(yǎng)時(shí),，到第2天,，細(xì)胞通常可以擴(kuò)增到具有更多培養(yǎng)基的更大的燒瓶中,。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到8×10 5個(gè)活細(xì)胞/ ml時(shí)需要進(jìn)行傳代,。不允許細(xì)胞密度超過1×10（6）活細(xì)胞/ ml。）

二． 細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入到含4-6mL完quan培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液,，完quan培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完quan培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞換液: 通常情況下可以通過向正在生長(zhǎng)的細(xì)胞中添加完quan培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長(zhǎng),，每7天可以將細(xì)胞離心并重懸于新配的培養(yǎng)基中，來完成細(xì)胞的全換液,。

3） 細(xì)胞傳代：傳代時(shí)控制細(xì)胞密度在2-4 ×105cell / mL,，并在細(xì)胞生長(zhǎng)至8-10 ×105cell / mL時(shí)進(jìn)行傳代。

4） 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。    

1，細(xì)胞凍存時(shí),，取上清,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2,，4min ,，1000rpm 離心去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入凍存液,，輕輕混勻,，DMSO終濃度為5%，細(xì)胞密度2x106/支,，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液,，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。