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B95-8 EBV 轉(zhuǎn)化的絨猴白細胞介紹

B95-8細胞株源自暴露于人白血球中抽提的EB病毒的絨猴白血球。B95-8是一個連續(xù)株并釋放高滴度的轉(zhuǎn)染EB病毒,。此細胞株提供EB病毒用于建立人的連續(xù)淋巴細胞株,。

細胞特性

1） 來源：外周血淋巴細胞

2） 形態(tài)：淋巴母細胞樣，懸浮生長

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體,、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細胞方式：

（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇,；

（2）存活細胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,，再進行凍存,。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

（3）收到細胞后請拍照,，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,，請及時拍照與我們聯(lián)系。

細胞用途：僅供科研使用,。

B95-8 EBV 轉(zhuǎn)化的絨猴白細胞接收后的處理：

1） 收到細胞后,，請檢查是否漏液，如果漏液,，請拍照片發(fā)給我們,。

2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，酒精消毒瓶壁并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h,。

3） T25瓶中的培養(yǎng)基取出離心后,，去上清，添加6ml新的*培養(yǎng)基,，重新加入原T25培養(yǎng)瓶,。

4） 如果細胞長滿90%請及時進行細胞傳代，傳代培養(yǎng)用本公司附帶的*培養(yǎng)基,。

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基,；北美胎牛血清，10%,；雙抗1%,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),，補加培養(yǎng)基至6ml,。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%，即可進行傳代培養(yǎng),。

1.  收到細胞后*傳代推薦將細胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,，建議凍存一支備用，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2到1:5的比例進行,。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。

下面T25瓶為類,；

1,，細胞凍存時，取上清,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。

2，4min ,，1000rpm 離心去掉上清,。加1ml血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和DMSO,，輕輕混勻,，DMSO終濃度為10%，細胞密度1-2xE6/ml,，每支凍存管凍存1ml細胞懸液,，注意凍存管做好標(biāo)識。

3,，將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取