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B95-8 EBV 轉(zhuǎn)化的絨猴白細(xì)胞介紹

B95-8細(xì)胞株源自暴露于人白血球中抽提的EB病毒的絨猴白血球,。B95-8是一個(gè)連續(xù)株并釋放高滴度的轉(zhuǎn)染EB病毒,。此細(xì)胞株提供EB病毒用于建立人的連續(xù)淋巴細(xì)胞株。

細(xì)胞特性

1） 來(lái)源：外周血淋巴細(xì)胞

2） 形態(tài)：淋巴母細(xì)胞樣,，懸浮生長(zhǎng)

3） 含量：>1x106 個(gè)/mL

4） 污染：支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：

（1）干冰運(yùn)輸,，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇,；

（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng),，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。

（3）收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照,，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系,。

細(xì)胞用途：僅供科研使用,。

B95-8 EBV 轉(zhuǎn)化的絨猴白細(xì)胞接收后的處理：

1） 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液,，如果漏液,，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們,。

2） 請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，酒精消毒瓶壁并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h,。

3） T25瓶中的培養(yǎng)基取出離心后,，去上清，添加6ml新的*培養(yǎng)基,，重新加入原T25培養(yǎng)瓶,。

4） 如果細(xì)胞長(zhǎng)滿90%請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用本公司附帶的*培養(yǎng)基,。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基,；北美胎牛血清，10%,；雙抗1%,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1.  收到細(xì)胞后*傳代推薦將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,，建議凍存一支備用,，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2到1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。

下面T25瓶為類(lèi)；

1,，細(xì)胞凍存時(shí),，取上清，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2,，4min ,，1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO,，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%,，細(xì)胞密度1-2xE6/ml,，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí),。

3,，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱,，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取