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HE染色全名為蘇木精(hematoxylin)和伊紅(eosin)染色方法,，是基本的也是重要的病理學(xué)染色技術(shù),。

       HE染色是目前國(guó)內(nèi)外病理診斷上廣泛采用的 常規(guī)染色方法。一張好的HE切片是保證正確病理診斷的關(guān)鍵,。切片質(zhì)量的好壞,，可直接影響疾病診斷的及時(shí)與準(zhǔn)確性。作為一個(gè)合格的實(shí)驗(yàn)技術(shù)員,，能制作出一張高質(zhì)量的HE染色切片,，是必須掌握的一門重要功課。
        HE染色的實(shí)驗(yàn)原理及注意事項(xiàng)
       一,、細(xì)胞核染色原理：
       蘇木精為堿性天然染料,，可使細(xì)胞核著色。細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主要是DNA,，在DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中,，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負(fù)電荷,，呈酸性,，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性燃料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍(lán)色,，所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色,。
       二、細(xì)胞漿染色原理：

       細(xì)胞漿內(nèi)主要成分是蛋白質(zhì),，為兩性化合物,、細(xì)胞漿的染色與pH值有密切關(guān)系,，當(dāng)pH調(diào)到蛋白質(zhì)等電點(diǎn)4.7-5.0時(shí)，胞漿對(duì)外不顯電性,，此時(shí)酸或堿性染料不易染色,。當(dāng)pH調(diào)到6.7-6.8時(shí)，大于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)pH值,，表現(xiàn)酸性電離,，而帶負(fù)電荷的陰離子，可被帶正電荷的染料染色,，現(xiàn)時(shí)胞核也被染色,，核和胞漿難以區(qū)分。因此必須把pH調(diào)至胞漿等電點(diǎn)以下,，在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷（陽離子）,，就可被帶負(fù)電荷（陰離子）的染料染色。伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料,，在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子,，與蛋白質(zhì)的氨基正電荷（陽離子）結(jié)合而使細(xì)胞漿染色，細(xì)胞漿,、紅細(xì)胞,、肌肉、結(jié)締組織,，嗜伊紅顆料等被感染成不同程度的紅色或粉紅色,，與藍(lán)色的細(xì)胞核形成鮮明的對(duì)比。

HE染色

       三,、分化作用：
       染色后,，用某些特定的溶液將組織過多結(jié)合的染色劑脫去，這個(gè)過程稱為分化作用,，所用的溶液稱為分化液,。在HE染色中用0.5%鹽酸乙醇作為分化液，因酸能破壞蘇木精的醌型結(jié)構(gòu),，使組織與色素分離而褪色,。經(jīng)蘇木精染色后，必須用0.5%鹽酸乙醇分化,，使細(xì)胞核過多結(jié)合的蘇木精染料和細(xì)胞漿吸附的蘇木精染料脫去,，在進(jìn)行伊紅染色，才能保證細(xì)胞核與細(xì)胞漿染色的分明,。因此,，在HE染色中分化是極為關(guān)鍵的一步。
       四,、返藍(lán)作用：
       分化之后,，蘇木精在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài),，呈紅色，在堿性條件下處于藍(lán)色離子狀態(tài),，呈藍(lán)色,。組織切片經(jīng)0.5%鹽酸乙醇分化后呈紅色或粉紅色，故分化之后,，立即用水除去組織切片上的酸而終止分化,，再用弱堿性水（0.2%氨水）使蘇木精染上的細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色，這個(gè)過程稱為返藍(lán)作用或藍(lán)化作用,。另外用自來水浸洗也可使細(xì)胞核返藍(lán),，但所需時(shí)間較長(zhǎng)。
       實(shí)驗(yàn)材料
       固定液：常用95%乙醇和冰丙酮
       蘇木精染液：稱取蘇木精粉0.5g,，銨礬24g溶解于70ml蒸餾水中,，然后取NaIO 31g，水5ml,，再加入甘油30ml和冰醋酸2ml,，混合均勻，濾紙過濾,，備用。
       伊紅染液：稱取0.5g水溶性伊紅染液,，溶于100ml蒸餾水中,。
       稀鹽酸乙醇溶液：用75%乙醇配制1%鹽酸。
       系列濃度的乙醇,、二甲苯,、中性樹膠。
       培養(yǎng)瓶,、培養(yǎng)皿,、眼科鑷、蓋玻片,、載玻片,、顯微鏡。
       實(shí)驗(yàn)步驟
       樣品制備：對(duì)于貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞,，胰酶消化,，調(diào)整細(xì)胞濃度約1×105/ml，滴加于蓋玻片上(置于6孔板中),，培養(yǎng)相應(yīng)時(shí)間后,，取出細(xì)胞爬片，用PBS 洗滌3次,。
       樣品固定：95%乙醇固定20min,，PBS洗滌2次,，每次1min。
       染核：蘇木素染液染色2-3min,，自來水洗滌,。
       分色：鏡下觀察，若細(xì)胞核染色過深,，用1%鹽酸酒精溶液分色數(shù)秒,，自來水洗滌。
       染胞質(zhì)：浸入伊紅染液染色1min,，自來水洗滌,。
       吹干或自然晾干細(xì)胞 爬片后，中性樹膠封片,。
       若細(xì)胞用4%多聚甲醛固定,，則染色時(shí)間相應(yīng)延長(zhǎng)，蘇木素染色12-15min,，伊紅5min即可,。
       實(shí)驗(yàn)結(jié)果及注意事項(xiàng)

       實(shí)驗(yàn)結(jié)果

       細(xì)胞核呈藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì),，肌纖維,，膠原纖維和紅細(xì)胞呈不同程度的紅色。鈣鹽和細(xì)菌可呈藍(lán)色或紫藍(lán)色

       注意事項(xiàng)：
       1.  染色時(shí)調(diào)節(jié)pH值很重要,。如果組織塊在福爾馬林中固定時(shí)間長(zhǎng),，組織酸化而影響細(xì)胞核著色。因此,，要在自來水中沖洗時(shí)間長(zhǎng)一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min,，這樣可以使細(xì)胞核著色較深。染伊紅時(shí)胞漿著色不佳,，可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸,。
       2.  切片染蘇木精后，分色這一步是關(guān)鍵,，應(yīng)在顯微鏡下控制進(jìn)行,，一般以細(xì)胞核染色清楚（晰）而細(xì)胞質(zhì)基本無色為佳。如果過分延長(zhǎng)分色時(shí)間將導(dǎo)致染色太淺,，應(yīng)重新染色后再行分色,。
       3.  切片經(jīng)酒精脫水后，入二甲苯時(shí)可出現(xiàn)白色不透明狀態(tài),，此為脫水不*,，應(yīng)將切片退回*，更換酒精、二甲苯,，以求*脫水與透明,。

       4.  在染色過程中不要讓切片干燥，以免切片收縮,、變形,，影響神經(jīng)元形態(tài)。

       5.  切片從二甲苯取出或進(jìn)入二甲苯前,，切片周邊均應(yīng)擦干凈或吸干多余水分,。

       6.  后封固時(shí)，要用中性樹脂,，防止日后褪色,，蓋片要選大于組織塊的面積，如漏出一部分不久將會(huì)褪色,，所用樹脂濃度要適當(dāng),，樹脂封固時(shí)不能有氣泡。

服務(wù)流程：

    1.聯(lián)系我們,，溝通客戶實(shí)驗(yàn)計(jì)劃及目標(biāo),，評(píng)估實(shí)驗(yàn)的的可行性。    

    2.依照客戶要求,，設(shè)計(jì)相應(yīng)的實(shí)驗(yàn),；或客戶已有實(shí)驗(yàn)方案發(fā)送給我們，我們研究方案的可操作性,。    

    3.確定終的實(shí)驗(yàn)方案,，報(bào)價(jià)和周期。    

    4.簽訂服務(wù)合同,，支付預(yù)付款。    

    5.開始實(shí)驗(yàn)服務(wù),，并定期向客戶反饋和交流,。    

    6.實(shí)驗(yàn)完成，提供完整實(shí)驗(yàn)說明和部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。    

    7.支付尾款,，向客戶提供完整的全部實(shí)驗(yàn)報(bào)告和原始數(shù)據(jù)。    

    8.項(xiàng)目完成,。