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LS174T 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞/STR鑒定/鏡像綺點(diǎn)（iCell）介紹

細(xì)胞介紹

該細(xì)胞是LS180結(jié)腸腺癌細(xì)胞株的yi蛋白酶化變種。它比親本更易傳代,，像LS180一樣生成大量的癌胚抗原(CEA),。電鏡研究表明，它有豐富的微絲和胞漿黏液素液泡,；血清學(xué)檢測直腸抗原3陽性；p53抗原表達(dá)陰性,，但mRNA表達(dá)陽性,；角蛋白陽性；癌基因c-myc,、N-myc,、H-ras、N-ras,、Myb和fos的表達(dá)呈陽性,；癌基因k-ras和sis的表達(dá)未做檢測；可產(chǎn)生IL-10,、IL-6和黏蛋白,。

細(xì)胞特性

1） 來源：人結(jié)直腸

2） 形態(tài)：上皮樣，貼璧生長

3） 含量：>1x106 個(gè)/mL

4） 污染：支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：

（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇,；

（2）存活細(xì)胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存,。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。

（3）收到細(xì)胞后請拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,，請及時(shí)拍照與我們聯(lián)系,。

細(xì)胞用途：僅供科研使用。

LS174T 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞/STR鑒定/鏡像綺點(diǎn)（iCell）接受后的處理：

1） 收到細(xì)胞后,，請檢查是否漏液,，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們,。

2） 請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài),，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,，添加6ml新的*培養(yǎng)基,。

4） 如果細(xì)胞長滿（90%以上）請及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代。

5） 接到細(xì)胞次日,，請檢查細(xì)胞是否污染,，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系,。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%,；雙抗,，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

對(duì)于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 收到細(xì)胞后*傳代推薦將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,，建議凍存一支備用，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2到1:5的比例進(jìn)行,。

細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

下面T25瓶為例,；

1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后,，PBS清洗瓶底1-2次后加入1mlyi酶,，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。

2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,，加DMSO至終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,，注意凍存管做好標(biāo)識(shí),。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。

3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱,，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。

鏡像綺點(diǎn)（上海）細(xì)胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)：

一,、原代細(xì)胞服務(wù)
      各類模式哺乳動(dòng)物的多種原代細(xì)胞資源,；
      多種人源性正常及腫瘤原代細(xì)胞資源；
      原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑,、kit,、培養(yǎng)基添加劑等；
      原代細(xì)胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)和整體實(shí)驗(yàn)外包服務(wù),；

二,、細(xì)胞株/系服務(wù)
      細(xì)胞株/系培養(yǎng)、增殖,、凍存和相關(guān)說明書,；
      細(xì)胞系培養(yǎng)過程的技術(shù)指導(dǎo)；
      細(xì)胞系培養(yǎng)基,、添加劑,、血清及相關(guān)生長因子、試劑等,；

三,、iPS細(xì)胞
      iPS細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層在）；
      iPS細(xì)胞增殖及冷凍保存,；
      iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實(shí)習(xí),；
      新藥及實(shí)驗(yàn)儀器上市前評(píng)估；

四,、技術(shù)外包服務(wù)：各類細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn),、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)、顯微鏡拍照服務(wù)等

五,、其他：根據(jù)客戶需要定制服務(wù)等