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GES-1 人胃黏膜上皮細胞/STR鑒定

描述

該細胞是從9個月的胎兒胃上皮細胞中培養(yǎng)分離出來，經過SV40病毒轉染后,，篩選獲得,。不能在裸鼠中成瘤，是在研究人胃腫瘤過程中一種重要的模式系統(tǒng),。

細胞特性

1） 來源：胃

2） 形態(tài)：上皮樣,，貼壁細胞

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：

（1）干冰運輸,，收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇,；

（2）存活細胞，收到后應繼續(xù)生長,，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟,。

（3）收到細胞后請拍照，3天內如果發(fā)現(xiàn)污染,，請及時拍照與我們聯(lián)系。

細胞用途：僅供科研使用,。

GES-1 人胃黏膜上皮細胞/STR鑒定

接收后的處理：

1） 收到細胞后，請檢查是否漏液,，如果漏液,，請拍照片發(fā)給我們。

2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài),，酒精消毒瓶壁并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h,。

3） 將T25瓶中的細胞培養(yǎng)基離心后，去上清,，添加6ml*培養(yǎng)基，加入新的T25瓶中繼續(xù)培養(yǎng),。

4) 如果細胞長滿80%請及時進行細胞傳代.

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備DMEM培養(yǎng)基；北美胎牛血清,，10%；2 mM glutamine(谷an酰胺);1 mM pyruvate(丙酮酸鹽); 50 μM 2-mercaptoethanol(巰基乙醇);雙抗,，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存細胞：凍存細胞時,，用FBS重懸細胞，然后加入一定量的DMSO,，輕輕混合均勻后移入到凍存管中,，DMSO終濃度為10%,。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),，補加培養(yǎng)基至6ml,。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%，即可進行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml此細胞的培養(yǎng)基終止消化,。

3. 輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4 . 收到細胞后*傳代推薦將細胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,，建議凍存一支備用,，后續(xù)傳代根據實際情況按1:2到1:4的比例進行。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。

下面T25瓶為類；

1,，細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1-2mlyi酶（含EDTA）,，細胞變圓脫落后,，加入2-3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數板計數,。

2,，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞,，根據細胞數量加入血清和等體積的凍存液,，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%,，細胞密度不低于1x10E6/ml,，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識,。

3,，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱,，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。

鏡像綺點（上海）細胞技術有限公司主要產品和服務介紹：

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