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MET-5A 人膜間皮細胞（STR鑒定）

細胞特性

1） 來源：間皮

2） 形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：

（1）干冰運輸,，收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇；

（2）存活細胞,，收到后應繼續(xù)生長,，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存,。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟,。

（3）收到細胞后請拍照，3天內如果發(fā)現(xiàn)污染,，請及時拍照與我們聯(lián)系,。

細胞用途：僅供科研使用。

MET-5A 人膜間皮細胞（STR鑒定）

接受后的處理：

1） 收到細胞后,，請檢查是否漏液,，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們,。

2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài),，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,，添加6ml新的*培養(yǎng)基,。

4） 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代。

5） 接到細胞次日,，請檢查細胞是否污染,，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們取得聯(lián)系,。

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備Medium 199培養(yǎng)基,；添加NaHCO3 1.5g/L，3.3 nM EGF,，400 nM qing化可di松,，870 nM 牛胰島素，20 mM HEPES,，3.87 µg/L H2SeO3,；優(yōu)質胎牛血清，10%,；雙抗,，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入250px皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注：*次傳代推薦傳代比例為1:2,，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定,。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。

下面T25瓶為類,；

1,，細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS清洗一遍后加入1mlyi酶,，細胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。

2，4min 1000rpm 離心去掉上清,。加1ml血清重懸細胞,，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻,，DMSO終濃度為10%,，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液,，注意凍存管做好標識,。

3，將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱,，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

鏡像綺點（上海）細胞技術有限公司主要產品和服務介紹：

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