人胚腎細(xì)胞293T是293細(xì)胞株插入SV40T-抗原的溫度敏感基因后產(chǎn)生的高轉(zhuǎn)染效率的衍生細(xì)胞株,。人胚腎細(xì)胞；293,，上皮狀,，早期報(bào)道中指出該細(xì)胞基因組中含有腺病毒5（Ad5）基因組的左側(cè)端和右側(cè)端的DNA，但是明確了只存在其左側(cè)端的DNA,。經(jīng)過對Ad5的插入點(diǎn)的克隆測序發(fā)現(xiàn),，Ad5的1～4344位線性核苷酸整合入細(xì)胞染色體19q13.2。該細(xì)胞為人類腺病毒載體擴(kuò)增的宿主,?？杀磉_(dá)異常的玻連蛋白的細(xì)胞表面受體,，由整合素β1亞單位和玻連蛋白受體α-v亞單位組成。生物安全級別為2級,。
人胚腎細(xì)胞293T培養(yǎng)步驟主要如下：
1、培養(yǎng)皿/瓶用槍頭或移液管吸去原培養(yǎng)液,；
2,、無菌PBS或無菌生理鹽水洗滌3次（按培養(yǎng)體積加入）；
3,、加入適量胰酶消化適當(dāng)時間（一般胰酶為0.25%,；9cm/10cm培養(yǎng)皿和25cm培養(yǎng)瓶，一次加入1mL胰酶,。消化時間視細(xì)胞類型等多種情況綜合考慮,，一般如果是細(xì)胞株，非原代培養(yǎng),，消化1－2分鐘足矣）,；
4、用槍頭吹打數(shù)十次（視細(xì)胞類型而定,。一般細(xì)胞株30－50次吧,，耗時一般2分鐘左右）；
5,、加入適量體積*培養(yǎng)基終止胰酶消化（如果是9cm/10cm培養(yǎng)皿和25cm培養(yǎng)瓶,，可以加入1mL*培養(yǎng)基；現(xiàn)在培養(yǎng)瓶（皿）里有2mL溶液）,。
6,、現(xiàn)在可以將溶液進(jìn)行分瓶（2mL）。如果是細(xì)胞株,，直接均分到兩個培養(yǎng)瓶（皿）里,。如果是原代培養(yǎng)，可以根據(jù)消化時間來對細(xì)胞進(jìn)行分離,；因此可以將溶液（2mL）都轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)瓶（皿）,。
7、將兩個培養(yǎng)瓶（皿）補(bǔ)足*培養(yǎng)基到正常體積（果是9cm/10cm培養(yǎng)皿和25cm培養(yǎng)瓶,，為5mL*培養(yǎng)液）
8,、鏡下觀察。剛剛傳代細(xì)胞還沒貼壁,，懸浮在溶液中,，呈圓形。一般2h之內(nèi)會貼壁,，如果已經(jīng)貼壁,，根據(jù)細(xì)胞類型有不同的形態(tài)，但通常都不是圓形。
9,、鏡下觀察無誤之后,，再放入細(xì)胞培養(yǎng)箱。培養(yǎng)瓶（皿）放入之前,，可以用消毒酒精先擦一下,。
10、人胚腎細(xì)胞293T傳代之后,，第二天細(xì)胞換液一次,。當(dāng)然，也可以視情況而定,。
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