人臍靜脈細(xì)胞HUVEC是一種來源于臍帶組織的干細(xì)胞,。它是臍靜脈的重要細(xì)胞之一,，在理論上可以無限期地通過。因此,，人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）經(jīng)常用于血管內(nèi)皮細(xì)胞實驗,，而不是靜脈內(nèi)皮細(xì)胞或動脈內(nèi)皮細(xì)胞。臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞易于獲得且來源充足,，因此,，臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)常用于血管內(nèi)皮研究。那么,，您真的了解它的培養(yǎng)實驗步驟嗎,？
1、將15-20cm長的新生兒臍帶儲存在無菌PBS溶液中,。（注意：應(yīng)在4℃下保存24小時,，在室溫下保存不超過6小時，否則將被丟棄,。）
2,、將鈍針插入臍靜脈管，并用無菌PBS溶液沖洗3-5次,，直到將臟血洗凈為止,。
3、用手術(shù)鉗夾住臍帶下端,，添加15ml膠原酶（1mg/ml）在室溫下消化15-20分鐘,，并不時搖動臍帶。
4,、消化后,，松開下部的手術(shù)鉗，將消化液倒入50ml無菌離心管中,，并用無菌PBS溶液沖洗臍帶2-3次,。
5、離心收集的液體（2000rpm）3分鐘,。
6,、除去上清液，加入10mlM199培養(yǎng)基（添加10u/mlbFGF）,，用肘部吹動細(xì)胞,，將所有液體轉(zhuǎn)移到裝有明膠的培養(yǎng)瓶中，并在37℃下培養(yǎng),。（注：在每個培養(yǎng)瓶中加入3-4ml無菌1％明膠溶液,，充分搖動以使明膠溶液*覆蓋瓶底,，并在37℃下孵育至少2小時。使用前將明膠溶液倒入,。明膠涂層有助于細(xì)胞粘附,。）
7、將人臍靜脈細(xì)胞HUVEC培養(yǎng)24小時后,，倒出培養(yǎng)基并用無菌PBS溶液洗滌2-3次,。洗去紅細(xì)胞和死細(xì)胞，并加入10ml新鮮的M199培養(yǎng)基,。
8,、應(yīng)每2天更換一次介質(zhì)（每次應(yīng)更換2/3的介質(zhì)）。
9,、培養(yǎng)5-7天后,，細(xì)胞可以生長到80-90％的單層，然后可以傳代,。
10,、倒出培養(yǎng)基，用無菌PBS溶液洗滌2-3次,，添加2-3ml消化液（0.25％胰蛋白酶+0.1％EDTA）消化細(xì)胞,。在顯微鏡下觀察。一旦細(xì)胞變圓,，添加2-3次含血清的DMEM培養(yǎng)基以終止反應(yīng),。
11、用彎頭吹干細(xì)胞,，然后將消化的細(xì)胞以2000rpm的速度轉(zhuǎn)移到50ml無菌離心管中3分鐘,。
12、倒出上清液,，加入10ml新鮮培養(yǎng)基。通常,，可以在一瓶中傳代3-4瓶細(xì)胞,，然后據(jù)此傳代培養(yǎng)。
13,、人臍靜脈細(xì)胞HUVEC通常傳代2-3代（約20天）用于各種實驗,。
7
立即詢價
您提交后,，專屬客服將第一時間為您服務(wù)