人臍靜脈細胞HUVEC是一種來源于臍帶組織的干細胞。它是臍靜脈的重要細胞之一,，在理論上可以無限期地通過,。因此，人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）經(jīng)常用于血管內皮細胞實驗,，而不是靜脈內皮細胞或動脈內皮細胞,。臍靜脈內皮細胞易于獲得且來源充足，因此,，臍靜脈內皮細胞經(jīng)常用于血管內皮研究,。那么，您真的了解它的培養(yǎng)實驗步驟嗎,？
1,、將15-20cm長的新生兒臍帶儲存在無菌PBS溶液中。（注意：應在4℃下保存24小時,，在室溫下保存不超過6小時,，否則將被丟棄。）
2,、將鈍針插入臍靜脈管,，并用無菌PBS溶液沖洗3-5次，直到將臟血洗凈為止,。
3,、用手術鉗夾住臍帶下端，添加15ml膠原酶（1mg/ml）在室溫下消化15-20分鐘,，并不時搖動臍帶,。
4、消化后,，松開下部的手術鉗,，將消化液倒入50ml無菌離心管中，并用無菌PBS溶液沖洗臍帶2-3次,。
5,、離心收集的液體（2000rpm）3分鐘。
6,、除去上清液,，加入10mlM199培養(yǎng)基（添加10u/mlbFGF），用肘部吹動細胞,，將所有液體轉移到裝有明膠的培養(yǎng)瓶中,，并在37℃下培養(yǎng)。（注：在每個培養(yǎng)瓶中加入3-4ml無菌1％明膠溶液,，充分搖動以使明膠溶液*覆蓋瓶底，并在37℃下孵育至少2小時,。使用前將明膠溶液倒入,。明膠涂層有助于細胞粘附,。）
7、將人臍靜脈細胞HUVEC培養(yǎng)24小時后,，倒出培養(yǎng)基并用無菌PBS溶液洗滌2-3次,。洗去紅細胞和死細胞，并加入10ml新鮮的M199培養(yǎng)基,。
8,、應每2天更換一次介質（每次應更換2/3的介質）。
9,、培養(yǎng)5-7天后,，細胞可以生長到80-90％的單層，然后可以傳代,。
10,、倒出培養(yǎng)基，用無菌PBS溶液洗滌2-3次,，添加2-3ml消化液（0.25％胰蛋白酶+0.1％EDTA）消化細胞,。在顯微鏡下觀察。一旦細胞變圓,，添加2-3次含血清的DMEM培養(yǎng)基以終止反應,。
11、用彎頭吹干細胞,，然后將消化的細胞以2000rpm的速度轉移到50ml無菌離心管中3分鐘,。
12、倒出上清液,，加入10ml新鮮培養(yǎng)基,。通常，可以在一瓶中傳代3-4瓶細胞,，然后據(jù)此傳代培養(yǎng),。
13、人臍靜脈細胞HUVEC通常傳代2-3代（約20天）用于各種實驗,。
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