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　　人胚腎細(xì)胞293T的培養(yǎng)需要準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基,，90%,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基,，使293T細(xì)胞懸浮生長,。

　　1、培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

　　2,、凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存,。

　　3、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

　　4,、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

　　如果在人胚腎細(xì)胞293T培養(yǎng)過程中出現(xiàn)貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

　　1、棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

　　2,、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

　　3,、按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

　　4,、將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

　　5、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。

　　在人胚腎細(xì)胞293T培養(yǎng)過程中,，需要注意以下兩個事項：

　　1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系,。

　　2.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù),，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。