平滑肌即無紋肌的通稱,,平滑肌是由長紡錘形的單核細胞構成。它不構成獨立的器官,,而只是成為構成體壁和內臟壁的因素(肌層),。平滑肌細胞互相連接,形成管狀結構或中空器官,;在功能上可以通過縮短和產生張力使器官發(fā)生運動和變形,,也可產生連續(xù)收縮或緊張性收縮,使器官對抗所加負荷而保持原有的形狀,。
小鼠支氣管平滑肌細胞的收縮,、舒張、增殖和凋亡與臨床許多疾病的病理生理過程有關.如支氣管哮喘,、慢性阻塞性肺疾病等,。例如在哮喘發(fā)病時,可以檢測到氣管平滑肌發(fā)生數目的增生和肥大,,表型也發(fā)生改變,,由收縮型轉為合成型與分泌型,并分泌多種與細胞因子,;而且出現向氣管腔遷移的跡象,。
小鼠支氣管平滑肌細胞來源于實驗動物正常支氣管組織,,長梭狀細胞,貼壁培養(yǎng),。通過平滑肌肌動蛋白(α-SMA)免疫熒光染色鑒定為陽性,,鑒定純度高于90%,不含有 HIV-1,、 HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌。
(1)儀器
儀器名稱 | 規(guī)格型號 | 廠家 |
生物安全柜 | BSC-1500ⅡA2-X | 濟南鑫貝西生物技術有限公司 |
CO2細胞培養(yǎng)箱 | BC-J160S | 上海博迅實業(yè)有限公司 |
熒光倒置顯微鏡 | DS-Ri2 | Nikon |
高速冷凍離心機 | Multifuge X1R | Thermo Fisher |
電熱恒溫鼓風干燥箱 | DHG-9123A | 上海精宏實驗設備有限公司 |
(2)試劑耗材
試劑名稱 | 規(guī)格/貨號 | 廠家 |
T25細胞培養(yǎng)瓶 | 430639 | Coming |
血球計數板 | Neubauer improved | Marienfeld |
細胞培養(yǎng)孔板 | WHB-24 | 上海臥宏生物科技有限公司 |
平滑肌細胞*培養(yǎng)基 | PriMed-iCell-004 | 鏡像綺點(上海)細胞技術有限公司 |
0.25%胰蛋白酶(含0.02%EDTA) | 1734858 | Gibico |
2.小鼠支氣管平滑肌細胞的分離培養(yǎng)
1) 取4-5周齡的小鼠,,斷頸處死后,,泡于75%的酒精中,
2) 剖開胸腔,,取出完整氣管及肺組織,,放入無菌PBS中,
3) 在體視顯微鏡下,,小心分離出下游支氣管,,
4) 用眼科剪及鑷子分離肌層并剪碎,
5) 加入0.1% I + II + IV + dispase,,4℃過夜消化,,
6) 第二天置于37℃水浴搖床中消化2~3h,
7) 待液體變渾濁后加入*培養(yǎng)基終止消化,,充分吹打,,
8) 過100目篩網,收集濾液,,1000rpm離心5min,,棄去上清,
9) 用*培養(yǎng)基重懸沉淀,,鋪瓶,。
除了上述的細胞分離方法以外,鏡像綺點還有很多關于其他細胞的分離方法,,想要學習的小伙伴可以來鏡像綺點進行現場學習,,如果想要其他原代分離培養(yǎng)方法,可在購買相應的細胞過程中,,贈送該細胞的分離方法及培養(yǎng)條件,,想要了解更多,打電話或咨詢相關工作人員,。
立即詢價
您提交后,專屬客服將第一時間為您服務