成纖維細胞屬于由中胚層分化而來的間質(zhì)細胞,。細胞來源于人正常的皮膚組織,成纖維細胞是一種貼壁培養(yǎng)方式的細胞,,由于這些細胞非常容易培養(yǎng),,它們已經(jīng)被廣泛用于細胞和分子生物學研究中。
一般而言,,成纖維細胞能夠分泌I型和III型膠原等細胞外基質(zhì),,并且研究表明不同器官中的成纖維細胞有顯著的不同。傷口修復時,,成纖維細胞由可增殖,,可遷移的表型變?yōu)橛惺湛s性的,可重塑基質(zhì)的表型,,同時,,它們會分泌大量的透明質(zhì)酸來應(yīng)對修復時的炎癥反應(yīng)。
以下是鏡像綺點提供的一種人成纖維細胞的制備方式(僅供參考):
1.首先在分離成纖維細胞時要做到在無菌條件下進行,,打開生物安全柜紫外燈30min作無菌處理,。
2.將手術(shù)廢棄的皮膚組織浸泡75%酒精,消毒2min,,
3.將皮膚組織置含P/S的PBS中清洗至少3遍,,
4.然后用眼科剪除去脂肪及結(jié)締組織等,
5.將皮膚剪成0.5*0.5 cm小塊,,放入dish中,,加0.1%的dispase溶液,封口膜封口,,4℃冰箱過夜消化,,
6.第二天,用鑷子將表皮與分開(薄的那層是表皮,,厚的那層是),,
7.將剪碎,移至離心管,,用0.1%膠原Ⅰ型酶+0.1%膠原Ⅱ型酶+0.1%膠原Ⅳ型酶+ 37℃水浴鍋中消化至少2 h(視消化程度而定),,
8.用100 μm網(wǎng)篩過濾,,
9.取濾液,300 g,,離心5 min,,
10.用*培養(yǎng)基重懸沉淀,
11.鋪瓶,,
12.隔天換液,。
以上是皮膚成纖維細胞分離培養(yǎng)的一種方式,,不同的技術(shù)人員分離培養(yǎng)的方法也不同,,使用的試劑比例也不盡相同,皮膚成纖維細胞特異性纖維連接蛋白或波形蛋白表達檢測,,采用細胞免疫熒光技術(shù),。細胞純度可高達于90%,所有的細胞均視為有潛在的生物危害性,,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。
立即詢價
您提交后,,專屬客服將第一時間為您服務(wù)