成纖維細(xì)胞屬于由中胚層分化而來的間質(zhì)細(xì)胞。細(xì)胞來源于人正常的皮膚組織,,成纖維細(xì)胞是一種貼壁培養(yǎng)方式的細(xì)胞,,由于這些細(xì)胞非常容易培養(yǎng),它們已經(jīng)被廣泛用于細(xì)胞和分子生物學(xué)研究中,。
一般而言,,成纖維細(xì)胞能夠分泌I型和III型膠原等細(xì)胞外基質(zhì),并且研究表明不同器官中的成纖維細(xì)胞有顯著的不同,。傷口修復(fù)時,,成纖維細(xì)胞由可增殖,可遷移的表型變?yōu)橛惺湛s性的,,可重塑基質(zhì)的表型,,同時,它們會分泌大量的透明質(zhì)酸來應(yīng)對修復(fù)時的炎癥反應(yīng),。
以下是鏡像綺點(diǎn)提供的一種人成纖維細(xì)胞的制備方式(僅供參考):
1.首先在分離成纖維細(xì)胞時要做到在無菌條件下進(jìn)行,,打開生物安全柜紫外燈30min作無菌處理。
2.將手術(shù)廢棄的皮膚組織浸泡75%酒精,,消毒2min,,
3.將皮膚組織置含P/S的PBS中清洗至少3遍,
4.然后用眼科剪除去脂肪及結(jié)締組織等,,
5.將皮膚剪成0.5*0.5 cm小塊,,放入dish中,加0.1%的dispase溶液,,封口膜封口,,4℃冰箱過夜消化,
6.第二天,,用鑷子將表皮與分開(薄的那層是表皮,,厚的那層是),
7.將剪碎,,移至離心管,,用0.1%膠原Ⅰ型酶+0.1%膠原Ⅱ型酶+0.1%膠原Ⅳ型酶+ 37℃水浴鍋中消化至少2 h(視消化程度而定),
8.用100 μm網(wǎng)篩過濾,,
9.取濾液,,300 g,離心5 min,,
10.用*培養(yǎng)基重懸沉淀,,
11.鋪瓶,
12.隔天換液,。
以上是皮膚成纖維細(xì)胞分離培養(yǎng)的一種方式,,不同的技術(shù)人員分離培養(yǎng)的方法也不同,使用的試劑比例也不盡相同,皮膚成纖維細(xì)胞特異性纖維連接蛋白或波形蛋白表達(dá)檢測,,采用細(xì)胞免疫熒光技術(shù),。細(xì)胞純度可高達(dá)于90%,所有的細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。
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