轉(zhuǎn)染（Transfection）是指將DNA或者RNA導(dǎo)入真核細胞中的過程,。轉(zhuǎn)染的目的是產(chǎn)生重組蛋白,，或特異性增強或抑制轉(zhuǎn)染細胞中的基因表達。細胞轉(zhuǎn)染有哪些類型和方法呢,？
1）根據(jù)導(dǎo)入的核酸存在于宿主細胞的時間長短,，可以分為瞬轉(zhuǎn)和穩(wěn)轉(zhuǎn)。
| 瞬轉(zhuǎn) | 穩(wěn)轉(zhuǎn) |
導(dǎo)入的DNA沒有整合到基因組中,，而是保留在細胞核上 | 導(dǎo)入的DNA整合到基因組中 |
導(dǎo)入的遺傳物質(zhì)不傳遞到子代,； 遺傳改變只是暫時的 | 導(dǎo)入的遺傳物質(zhì)能夠代代相傳；遺傳改變是*的 |
不需要選擇性篩選 | 需要選擇性篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞 |
DNA載體和RNA都可用于瞬時轉(zhuǎn)染 | 只有DNA載體可用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,；RNA本身不能穩(wěn)定地導(dǎo)入細胞中 |
導(dǎo)入的遺傳物質(zhì)的高拷貝數(shù)導(dǎo)致高水平的蛋白質(zhì)表達,。 | 單拷貝數(shù)或低拷貝數(shù)的穩(wěn)定整合的DNA導(dǎo)致較低水平的蛋白質(zhì)表達。 |
通常在轉(zhuǎn)染后24-96小時內(nèi)收獲細胞,。 | 需要2-3周的時間篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞克隆,。 |
通常不適合使用具有誘導(dǎo)型啟動子的載體的研究。 | 適用于使用帶有誘導(dǎo)型啟動子的載體的研究,。 |
2）根據(jù)轉(zhuǎn)染方式可以分為化學(xué),，生物，物理方法,。
| 轉(zhuǎn)染類型 | 轉(zhuǎn)染方法 | 原理 | 應(yīng)用 | 特點 |
| 化學(xué)轉(zhuǎn)染法 | 磷酸鈣法 | 磷酸鈣DNA復(fù)合物吸附細胞膜被細胞內(nèi)吞 | 穩(wěn)轉(zhuǎn)， 瞬轉(zhuǎn) | 不適用于原代細胞,，操作簡便但重復(fù)性差,，有些細胞不適用 |
陽離子 | 帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復(fù)合物被細胞內(nèi)吞 | 穩(wěn)轉(zhuǎn)， 瞬轉(zhuǎn) | 適用性廣,，轉(zhuǎn)染效率高,，重復(fù)性好，但轉(zhuǎn)染時需除血清,。轉(zhuǎn)染效果隨細胞類型變化大 | |
DEAE-右旋糖苷法 | 帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復(fù)合物被細胞內(nèi)吞 | 瞬轉(zhuǎn) | 相對簡便,、結(jié)果可重復(fù)，但對細胞有一定的毒副作用,，轉(zhuǎn)染時需除血清 | |
| 生物轉(zhuǎn)入法 | 病毒介導(dǎo)法 | 通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中 | 穩(wěn)轉(zhuǎn) | 可用于難轉(zhuǎn)染的細胞,、原代細胞,，體內(nèi)細胞等 |
逆轉(zhuǎn)錄病毒 | 特定宿主 | 但攜帶基因不能太大細胞需處分裂期，需考慮安全因素 | ||
腺病毒 | 通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中 | 瞬時轉(zhuǎn)染 | 可用于難轉(zhuǎn)染的細胞 | |
| 物理轉(zhuǎn)染法 | Biolistic顆粒傳遞法 | 將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀,，再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細胞,，DNA在胞內(nèi)逐步釋放表達 | 瞬轉(zhuǎn) | 可用于：人的表皮細胞，纖維原細胞,，淋巴細胞系以及原代細胞 |
電穿孔法 | 高脈沖電壓破壞細胞膜電位,，DNA通過膜上形成的小孔導(dǎo)入 | 穩(wěn)轉(zhuǎn)，瞬轉(zhuǎn) | 適用性廣但細胞致死率高,，DNA和細胞用量大 | |
顯微注射法 | 用顯微操作將DNA直接注入靶細胞核 | 穩(wěn)轉(zhuǎn),，瞬轉(zhuǎn) | 轉(zhuǎn)染細胞數(shù)有限，多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動物的胚胎細胞 |
二,、 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法
1,、材料
293T細胞、MyoD表達質(zhì)粒和EGFP表達質(zhì)粒,、DMEM培養(yǎng)基,、鏈霉素/青霉素(雙抗)、FCS(小牛血清),、PBS(磷酸鹽緩沖溶液),、胰酶/EDTA消化液、轉(zhuǎn)染試劑(TransFast)
2,、器材
20ul/200ul/1ml微量移液器和Tip頭酒精燈,、廢液缸、血球計數(shù)板,、渦旋振蕩器,、恒溫水浴箱、臺式離心機,、35mm培養(yǎng)皿,、轉(zhuǎn)染管、15ml離心管,、觀察用倒置顯微鏡熒光顯微鏡和CCD
3,、實驗步驟
細胞傳代
(1)試驗準備：200ul/1mlTip頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球,，廢液缸,，試管架，微量移液器,，記號筆,，培養(yǎng)皿，離心管。
......
7
立即詢價
您提交后,，專屬客服將第一時間為您服務(wù)