商品介紹:
CPI-360是一種有效的選擇性EZH2抑制劑,作用于wt EZH2和Y641N EZH2時,IC50分別為0.5nM和2.5nM。 注:本品僅可用于科研實驗,,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1802175-06-9 純度:97.21% 分子量:437.53 儲存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
EZH2抑制劑(CPI-360) | CPI-360 | 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水),。
2) 對于懸浮細胞,,500-1000g離心5min收集細胞,。
對于貼壁細胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,,胰酶消化時間不宜過長或過短,,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,,共洗滌兩次,。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置,。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),,F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標,。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光,。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán),。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,5%,。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng),。
對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
金耳人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子2Anti-PPP3CB Antibody人Bκ 輕肽基因增強子核因子抑制因子ε(Nfkbie)
變異短波單胞菌小鼠組蛋白H2bAnti-PPP4R2 Antibody人Bκ 輕肽基因增強子核因子抑制因子ε(Nfkbie)
橄欖色盤多毛孢大鼠激M2型同工Anti-PPP4R1L Antibody人ADAM金屬肽含血小板反應(yīng)蛋白1基元4(ADAMTS4)
糞鏈球菌人抑瘤MAnti-PPP2R3C Antibody人ADAM金屬肽含血小板反應(yīng)蛋白1基元4(ADAMTS4)
羊肚菌小鼠血管內(nèi)皮粘附分子1Anti-PRDM1 Antibody人類似RIKEN cDNA 4933429F08 基因
黑曲霉小鼠糖皮質(zhì)類固受體Anti-PRAF2 Antibody人類似RIKEN cDNA 4933429F08 基因
中國臺灣根霉人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白DAnti-PRDM1 Antibody人孕和adipoQ受體家族成員Ⅶ(PAQR7)
長雙歧桿菌長亞種大鼠γ基丁Anti-PPRC1 Antibody人孕和adipoQ受體家族成員Ⅶ(PAQR7)
細孢毛霉小鼠黃體生成釋放激Anti-PRDM12 Antibody人集蛋白亞家族成員11(COLEC11)
大腸桿菌大鼠5羥色Anti-PRIM1 Antibody人集蛋白亞家族成員11(COLEC11)
真姬菇人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白CAnti-PRIM1 Antibody人絲蛋白抑制因子肽抑制因子進化枝3G(Serpina3g)
紫色鏈霉菌人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白BAnti-PRKACA Antibody人絲蛋白抑制因子肽抑制因子進化枝3G(Serpina3g)
費希爾曲霉大鼠P物質(zhì)受體Anti-PRIM1 Antibody人類似RIKEN cDNA A630077B13 基因
產(chǎn)氣莢膜梭菌 A型小鼠腦紅蛋白Anti-PRKACB Antibody人類似RIKEN cDNA A630077B13 基因
蕓薹生鏈格孢人表面活性蛋白AAnti-PRKAG2 Antibody人類似RIKEN cDNA 3110050K21 基因
皺褶青霉小鼠8異前列腺Anti-PRKACG Antibody人類似RIKEN cDNA 3110050K21 基因
扭轉(zhuǎn)原腸胚形成同源蛋白1抗體黑根須腹菌人組織細胞淋巴瘤細胞
蛋白酪磷樣N前體蛋白抗體正紅菇貓淋巴瘤細胞
TUB蛋白抗體馨生棒孢LC-2/ad 人肺腺癌細胞
味覺受體蛋白家族2亞基16抗體麥斑點附球霉KPL-4 人乳腺癌細胞
EZH2抑制劑(CPI-360)彎孢 N-乙酰-L-異亮
產(chǎn)紫青霉 L-酪乙酯
松生擬層孔 D-天冬二甲酯鹽酸鹽
球形賴芽孢桿 D-酪甲酯鹽酸鹽
蝙蝠蛾擬青霉 D-脯甲酯鹽酸鹽
平田頭菇6-2 D-半胱
釀酒酵母 L-賴L-谷鹽
蠟樣芽胞桿 L-精L-天冬鹽
植物乳桿 DL-谷水合物
可溶黃色鏈霉 DL-半胱鹽酸鹽無水物
恥垢分枝桿 L-天冬酰一水
耶爾森氏屬 O-乙酰-L-絲鹽酸鹽
地衣芽孢桿 馬尿酰-組氨酰-亮
香栓孔 芴甲氧羰基-O-叔丁基-L-蘇
核桃黑盤孢 芴甲氧羰基-O-叔丁基-L-酪