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體外生長的人正常組織來源細(xì)胞培養(yǎng)的要求
閱讀：490 發(fā)布時間：2017-5-31人正常組織來源細(xì)胞營養(yǎng)成分
1. 氨基酸：所有細(xì)胞都需要12種必須氨基酸：纈,、亮、異亮,、蘇,、賴、色,、苯丙,、蛋、組,、酪,、精、胱氨酸,。
2. 單糖：六碳糖是主要能源,，也是合成某些氨基酸、脂肪,、核酸的原料,。細(xì)胞對葡萄糖的吸收能力zui高，半乳糖zui低,。 體外培養(yǎng)動物細(xì)胞時,，幾乎所有的培養(yǎng)基或培養(yǎng)液中都以葡萄糖作為必含的能源物質(zhì)。
3. 維生素：生物素,、葉酸,、煙酰胺、泛酸,、吡哆醇,、核黃素、硫胺素,、維生素b12都是培養(yǎng)基常有的成分,。
4. 無機(jī)離子與微量元素：細(xì)胞生長除需要鈉、鉀,、鈣,、鎂、氮和磷等基本元素,，還需要微量元素,，如鐵、鋅,、硒,、銅、錳,、鉬,、釩等。
促生長因子及激素
各種激素、生長因子對于維持細(xì)胞的功能,、保持細(xì)胞的狀態(tài)(分化或未分化)具有十分重要的作用,。有些激素對許多細(xì)胞生長有促生長作用，如胰島素,，它能促進(jìn)細(xì)胞利用葡萄糖和氨基酸,。有些激素對某一類細(xì)胞有明顯促進(jìn)作用。
滲透壓
細(xì)胞必須生活在等滲環(huán)境中,，大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞對滲透壓有一定耐受性,。人血漿滲透壓290mOsm/kg, 可視為培養(yǎng)人體細(xì)胞的理想滲透壓,。鼠細(xì)胞滲透壓在320mOsm/kg左右,。對于大多數(shù)哺乳動物細(xì)胞，滲透壓在260-320mOsm/kg的范圍都適宜,。
pH,、氣體
也是人正常組織來源細(xì)胞生存的必需條件之一，所需氣體豐要是氧和二氧化碳,。氧參與三羧酸循環(huán),，產(chǎn)生能量供給細(xì)胞生長、增殖和合成各種成分,。一些細(xì)胞在缺氧情況下,，借糖酵解也可獲取能量，但多數(shù)細(xì)胞缺氧不能生存,。在開放培養(yǎng)時,，一般置細(xì)胞于95%空氣加5%二氧化碳的混合氣體環(huán)境中培養(yǎng)。二氧化碳既是細(xì)胞代謝產(chǎn)物,，也是細(xì)胞所需成分,，它主要與維持培養(yǎng)基的pH有直接關(guān)系。動物細(xì)胞大多數(shù)需要輕微的堿性條件,，pH值約在7.2~7.4℃在細(xì)胞生長過程中,，隨細(xì)胞數(shù)量的增多和代謝活動的加強(qiáng)，二氧化碳不斷被釋放,，培養(yǎng)液變酸,，PH值發(fā)生變化。由于NaHCO3容易分解為二氧化碳,，很不穩(wěn)定,，致使緩沖系統(tǒng)難以地控制。故這一緩沖系統(tǒng)適合密閉培養(yǎng),。HEPES結(jié)合碳酸氫鈉使用,，可提供更有效的緩沖體系，主要是防止pH值迅速變動，但zui大缺點是在開放培養(yǎng)或觀察時難以維持正常的pH值,。造成pH波動主要是代謝產(chǎn)生的CO2,，在封閉式培養(yǎng)過程中CO2與水結(jié)合產(chǎn)生碳酸，培養(yǎng)基pH很快下降,。為解決這一問題,，合成培養(yǎng)基中使用了NaHCO3-CO2緩沖系統(tǒng)，并采用開放培養(yǎng),，使細(xì)胞代謝產(chǎn)生的CO2及時溢出培養(yǎng)瓶,，再通過穩(wěn)定調(diào)節(jié)溫箱中CO2濃度(5%)，與培養(yǎng)基中的NaHCO3處于平衡狀態(tài),。
無毒,、無污染
體外生長的細(xì)胞對微生物及一些有害有毒物質(zhì)沒有抵抗能力，因此培養(yǎng)基應(yīng)達(dá)到無化學(xué)物質(zhì)污染,、無微生物污染(如細(xì)菌,、真菌、支原體,、病毒等),、無其他對人正常組織來源細(xì)胞產(chǎn)生損傷作用的生物活性物質(zhì)污染(如抗體、補(bǔ)體),。對于天然培養(yǎng)基,，污染主要來源于取材過程及生物材料本身，應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格選材,，嚴(yán)格操作,。對于合成培養(yǎng)基，污染主要來源于配制過程,，配制所用的水,，器皿應(yīng)十分潔凈，配制后應(yīng)嚴(yán)格過濾除菌,。