以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,5%,。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存,。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
商品介紹:
BI689648是一種新型的,,高選擇性醛固酮合酶抑制劑,能抑制CYP11B1和CYP11B2,,其IC50值分別為310和2.1nM,。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號(hào):1633009-87-6 純度:99.20% 分子量:298.34 儲(chǔ)存條件:-20℃,,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用,。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水),。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞,。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次,。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml,。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)),。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置,。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),,F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),,PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán),。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán),。
無(wú)磷二氫鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ambrisentan磷化D酪激衰減蛋白2抗體包裝5g
無(wú)磷氫二鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ambrisentan磷化D酪激衰減蛋白2抗體包裝1g
無(wú)味霉A晶型(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dronedarone HCL膀胱癌缺失基因1包裝1g
無(wú)味霉B晶型(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dronedarone磷化膀胱癌缺失基因1抗體包裝1g
西吡銨(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ranolazine HCl多巴受體D4抗體包裝5g
西洛多辛(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ranolazine HCl橋粒斑蛋白1抗體包裝1g
西米替?。?biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lercanidipine HCl橋粒斑蛋白2抗體包裝250mg
西尼地平(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lercanidipine HCl多巴受體D5抗體包裝5g
西沙必利(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Promethazine Hydrochloride脫氧尿嘧啶三磷核苷解抗體包裝1g
西替利雜質(zhì)A(1-[(4-)基])(標(biāo)準(zhǔn)...英文名稱: Agomelatine多巴受體D3抗體包裝5g
昔萘沙美特羅(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Agomelatine誘捕受體3抗體包裝1g
烯酰嗎啉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Piracetam多巴轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白DAT抗體包裝1g
腺嘌呤(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ramelteon誘捕受體2抗體包裝5g
腺嘌呤核苷(腺苷)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lacosamide腫瘤調(diào)亡/死亡受體5抗體包裝1g
腺嘌呤鹽鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Milnacipran 核心蛋白聚糖抗體包裝5g
酵母菌Saccharomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于培養(yǎng)微管相關(guān)蛋白2試劑盒三白草;sauchinone
凍土毛霉Mucor│hiemalis 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品微管相關(guān)蛋白1A/1B輕鏈3B試劑盒2-O-alpha-L-鼠李吡喃糖甙鳶尾
青霉屬Penicillium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP,BR,可用于培養(yǎng)微管相關(guān)蛋白1A/1B輕鏈3A試劑盒尚含雞納甙;Quinovin
醛固酮合酶抑制劑(BI 689648)小鼠羥脯水飛薊汀;水飛薊亭Human, Mouse
人神經(jīng)降壓水合氧化前胡(標(biāo)準(zhǔn)品)Human
大鼠解整合樣金屬蛋白8水金鳳(標(biāo)準(zhǔn)品)Human
大鼠抗水晶蘭苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
人神經(jīng)激肽B水牛角粉(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
小鼠骨保護(hù)配體水翁花(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
大鼠胰島抗體水仙苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
小鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白水楊苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
人強(qiáng)啡肽水楊梅根(標(biāo)準(zhǔn)品)Human