商品介紹:
BTS是鈣離子刺激的肌球蛋白S1ATP酶抑制劑(IC50為5μM),能可逆地阻斷滑行運(yùn)動(dòng),。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1576-37-0 別名:N-Benzyl-p-toluenesulfonamide;N-Tosylbenzylamine 純度:99.57% 分子量:261.34 儲(chǔ)存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,,500-1000g離心5min收集細(xì)胞,。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞,。
3) 收集細(xì)胞后,,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,,共洗滌兩次,。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml,。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),,F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo),。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán),。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán),。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲(chǔ)存,。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
糙皮側(cè)耳人高分子量角蛋白Anti-PIGX Antibody人血管內(nèi)皮抑抗體(ES-Ab)
禾谷鐮刀菌小鼠磷脂A2Anti-PIKFYVE Antibody人血管內(nèi)皮抑抗體(ES-Ab)
變異棒桿菌大鼠抗增殖核抗原抗體Anti-PIP4K2B Antibody人血管緊張Ⅱ受體Ⅰa型(AgtrⅠa)
芽孢桿菌人肝癌抗原Anti-PIP5K Antibody人血管緊張Ⅱ受體Ⅰa型(AgtrⅠa)
普通鏈霉菌人凋亡蛋白激活因子1Anti-PIP5K1A Antibody人血管生成樣蛋白3(ANGPTL3)
根瘤菌小鼠組織因子途徑抑制物Anti-PIP5K1C Antibody人血管生成樣蛋白3(ANGPTL3)
抗輻射不動(dòng)桿菌大鼠脂蛋白脂Anti-PIPOX Antibody人α肌動(dòng)蛋白(α Actin)
豬屎豆根瘤菌大鼠抗性磷5bAnti-PKIB Antibody人α肌動(dòng)蛋白(α Actin)
枯草芽孢桿菌小鼠水通道蛋白5Anti-PITX1 Antibody人心肌錨蛋白重復(fù)域1(ANKRD1)
戊糖片球菌人鼻咽癌Anti-PJA2 Antibody人心肌錨蛋白重復(fù)域1(ANKRD1)
豬丹絲菌小鼠水通道蛋白4Anti-PKMYT1 Antibody人瘦受體(LEPR)
黃色短桿菌大鼠葡萄糖依賴性胰島釋放多肽Anti-PITPNB Antibody人瘦受體(LEPR)
德氏乳桿菌德氏亞種人膀胱癌抗原Anti-PKIA Antibody人血管緊張Ⅱ受體2(AT2R)
黑曲霉小鼠水通道蛋白3Anti-PKNOX2 Antibody人血管緊張Ⅱ受體2(AT2R)
大腸埃希菌大鼠糖原磷化同工IIAnti-PKP4 Antibody人血管緊張Ⅱ受體1(ANGⅡR-1)
紅霉鏈霉菌人廣譜角蛋白Anti-PLA1A Antibody人血管緊張Ⅱ受體1(ANGⅡR-1)
環(huán)指蛋白HCG1抗體橙鱗傘9人NK/T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞
甲狀腺激受體α1抗體肉色栓菌豬小腸上皮細(xì)胞
甲狀腺激受體α1+α2抗體干巴菌3豬回腸上皮細(xì)胞
脂滴相關(guān)蛋白TIP47抗體光硬皮馬勃大鼠冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞
肌球蛋白S1ATP酶抑制劑(BTS)矩圓黑盤孢 α-硫代甘油
橄欖色盾殼霉 諾酮
大腸埃希 化纈草
橘色硬皮馬勃 6''-二酸沙苑子苷單酯
栗疫 異莪術(shù)烯
巨大芽孢桿 β-乙酰氧基異戊酰阿寧
雙孢菇 異去甲蟛蜞菊內(nèi)脂
膠孢 莪術(shù)烯
芽孢桿屬 莪術(shù)二烯酮
紫蓋蜜環(huán) 二酰染料木苷
緊密枝頂孢霉 PinocemP-O-(3''-galloyl-4'',6''-(S)-hexahydroxydip
唾液乳桿水楊亞種 川麥冬甘A
雙環(huán)林地蘑菇 福林
蘋果鏈格孢 1,2-O-Dilinoleoyl-3-O-β-D-galactopyranosylracglyce
Hymenobacter chitinivorans 番茄堿