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上海谷研實業(yè)有限公司 |
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| 參考價 | 面議 |
更新時間：2022-04-21 12:26:59瀏覽次數(shù)：295
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 500T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | GOY-01X9650 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 公司產(chǎn)品僅供科研 | 英文名稱 | Calcein-AM/PI Double Stain Kit |
公司產(chǎn)品僅用于科研
細胞生物學(xué)研究有以下幾個方面：
細胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括：
①細胞核,、染色體以及基因表達的研究；
②生物膜與細胞器的研究,；
③細胞骨架體系的研究,；
④細胞增殖及其調(diào)控；
⑤細胞分化及其調(diào)控,；
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡),；
⑦細胞的起源與進化；
⑧細胞工程.
產(chǎn)品屬性：
中文名稱：Calcein-AM/PI活細胞/死細胞雙染試劑盒
英文名稱：Calcein-AM/PI Double Stain Kit
產(chǎn)品規(guī)格：500T
發(fā)貨周期：1～3天
商品介紹：
Calcein-AM是一種對活細胞進行熒光標(biāo)記的細胞染色試劑,，發(fā)綠色熒光（Ex=490nm, Em=515nm）,。因其在傳統(tǒng)的Calcein（鈣黃綠素）基礎(chǔ)上引入乙酰甲氧基甲酯（AM）基團,，增加了疏水性，使其能夠輕易穿透活細胞膜,。一旦進入細胞后,，Calcein-AM（本身不發(fā)熒光）被細胞內(nèi)的酯酶剪切形成膜非滲透性的極性分子Calcein，從而被滯留在細胞內(nèi)并發(fā)出強綠色熒光,。與其它同類試劑（如BCECF-AM和CFDA)相比,，由于Calcein, AM細胞毒性極低，是適合用于活細胞染色的熒光探針,，而且不會抑制任何的細胞功能,，如增殖和淋巴球的趨化性。 由于死細胞缺乏酯酶,，Calcein-AM僅用于對活細胞的細胞生存能力測試和短期標(biāo)記,。因此，Calcein-AM常常與死細胞熒光探針如碘化丙啶（PI）等聯(lián)合使用,，同時進行活細胞和死細胞的熒光雙重染色,。碘化丙啶（Propidium iodide，PI）不能穿過活細胞的細胞膜,，僅能穿過死細胞膜的無序區(qū)域而到達細胞核,，并嵌入細胞的DNA雙螺旋從而產(chǎn)生紅色熒光（Ex=535 nm, Em=617 nm），因此PI僅對死細胞染色,。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激發(fā),，因此可用熒光顯微鏡同時觀察活細胞和死細胞。而用545 nm激發(fā),，僅可觀察到死細胞,。 本試劑盒的工作原理就在于Calcein-AM和PI的雙重染料，來進行活細胞和死細胞的雙重染色標(biāo)記,，從而進行活細胞和死細胞水平的分析,。根據(jù)我司優(yōu)化的實驗體系，單次就200μl細胞懸液進行染色,。 注意事項 1）由于Calcein-AM對濕度非常敏感,，若是Calcein-AM溶液每次取完需要量后，必須緊緊密封蓋子,。建議根據(jù)單次用量,，分裝密封保存。Calcein-AM工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用,。 2）碘化丙啶（PI）有一定的致癌性,，操作時一定要注意防護。若接觸到皮膚,，需要立即用自來水清洗,。 3）為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。 儲存條件：-20℃,，有效期12個月 |
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5,、PBS沖洗細胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1,、在96孔板加入細胞100μL/孔,，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目,，需根據(jù)細胞的大小,，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2,、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物,。
3、將96孔板在37℃,，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間,。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液,。
5,、每孔加50μL 1× MTT 溶液,，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜,。
6,、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,，用平板搖床搖勻,。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片,，可以使用560-600nm 的濾光片）,。
8、結(jié)果分析
a,、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT,，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞）,，各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD,。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值,，C 為對照細胞的OD 值,。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
谷半胱連接催化亞基(GCLC)英文名稱：GCLC ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白11抗體包裝500mg
谷半胱連接(GCLM)英文名稱：GCLM ELISA Kit中心體蛋白55kDa抗體包裝5ml
孤啡肽(OFQ)英文名稱：OFQ ELISA Kit富含半胱與表皮生長因子樣蛋白2抗體包裝1g
高鐵血紅蛋白還原(MHBR)英文名稱：MHBR ELISA Kit骨架相關(guān)蛋白2/腫瘤和微管相關(guān)蛋白抗體包裝5g
高遷移率族蛋白1(HMG1)英文名稱：HMG1 ELISA Kit染色質(zhì)修飾蛋白4B(4C)抗體包裝1g
高密度脂蛋白(HDL)英文名稱：HDL ELISA Kit磷化非受體酪激c-Abl抗體包裝250mg
高分子量激肽原(HMWK)英文名稱：HMWK ELISA Kit磷化非受體酪激c-Abl抗體包裝1g
高爾基蛋白73(GP73)英文名稱：GP73 ELISA Kit磷化非受體酪激c-Abl抗體包裝5g
干細胞因子受體(SCFR)英文名稱：SCFR ELISA Kit酪蛋白激1γ2抗體包裝10MG
干細胞因子(SCF)英文名稱：SCF ELISA Kit柯薩奇病蛋白受體B抗體包裝100g
干擾誘導(dǎo)T-細胞α亞族趨化劑(ITαC)英文名稱：ITαC ELISA Kit腫瘤抑制因子FBW7抗體包裝25g
干擾調(diào)節(jié)因子3(IRF3)英文名稱：IRF3 ELISA Kit粘附分子4抗體包裝5g
干擾γ誘導(dǎo)單核因子(MIγ)英文名稱：MIγ ELISA Kit鈣調(diào)蛋白結(jié)合轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體包裝10g
干擾γ(IFNγ)英文名稱：IFNγ ELISA Kit周期依賴性激5激活結(jié)合蛋白C53抗體包裝5g
干擾β(IFNβ)英文名稱：IFNβ ELISA Kit著絲粒蛋白H抗體包裝1g
中甸隔指孢Dactylella│zhongdianensis 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR載脂蛋白C3試劑盒乙酰蒲公英萜;Taraxeryl ac
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品載脂蛋白C2試劑盒異古倫賓;IsocoluMbin
暫未定名Cystofilobasidium│infirmominiatum 質(zhì)量規(guī)格：進分,Sigma C1768載脂蛋白C1試劑盒;6-Hydroxyindole
Calcein-AM/PI活細胞/死細胞雙染試劑盒炭彎曲嗜酸 2-氯-3-氟-4-吡啶叉頭框蛋白O磷酸化Elisa
枯草芽孢桿 3-(4-甲基哌-1-基)苯胰島受體磷酸化Elisa
根瘤 2-溴-5-酚煙堿型乙酰膽堿受體Elisa
副豬嗜血桿 血卟啉單甲艱難梭BElisa
水黏結(jié)桿 多烯紫杉三水合物PAD-3 AbElisa
灰略紅鏈霉 3-甲磺酰氨基苯酸抗氨甲?；鞍卓贵wElisa
細鏈格孢 (3R,4R)-3-氨基-4-羥基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯異性腦炎特異性IgM抗體Elisa
大腸埃希氏 二乙基二硫代氨酸鈉高香草酸Elisa
藤倉赤霉 4,4,5,5,5-五氟-1-戊帕金森氏病2ParkinElisa
嗜麥芽黃單胞 3-氟-2-甲生長停滯基因CElisa
羅倫隱球酵母 匹伐他汀鈣CD63分子Elisa
大腸桿 6-溴-3,4-二氫-2H-異喹啉-1-酮白球蛋白樣受體亞家族A成員3Elisa
黑曲霉 2-氨基-6-氯苯鼠疫F1抗體Elisa
無氧芽孢桿 2-三氟甲基-4-內(nèi)皮轉(zhuǎn)化Elisa
枯草芽孢桿 順-六氫異林金黃色葡萄球Elisa
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