商品介紹:
PP1是一種有效的選擇性Src家族抑制劑,,抑制Lck和Fyn,IC50分別為5和6nM,。 注:本品僅可用于科研實驗,,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:172889-26-8 別名:AGL 1872;EI 275 純度:99.68% 分子量:281.36 儲存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Src家族抑制劑(PP1) | PP1 | 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水),。
2) 對于懸浮細(xì)胞,,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細(xì)胞,。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細(xì)胞,,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細(xì)胞,,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測),。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置,。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),,PI為縱坐標(biāo),。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強的綠色熒光,,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán),。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán),。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,5%,。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存,。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
假單胞菌大鼠二氧化Anti-MAPKAPK3 Antibody人腎(Renin)
平流層芽孢桿菌小鼠抗紅抗體Anti-MARCH2 Antibody人腎(Renin)
糞腸球菌麻疹病 IgG(間接法二步法)Anti-MARCH3 Antibody人腎上腺(EPI)
紅球菌麻疹病 IgM(間接法二步法)Anti-MARCH4 Antibody人腎上腺(EPI)
青霉屬柯薩奇病 IgG 混合型(間接法二步法)Anti-MARCH3 Antibody人雌二受體(ER)
布魯氏菌柯薩奇病 IgM 混合型(間接法二步法)Anti-MARCH5 Antibody人雌二受體(ER)
藤黃微球菌柯薩奇病 IgG Ⅰ(間接法二步法)Anti-MARCKS Antibody人甲狀旁腺激相關(guān)蛋白(PTHrP)
貪噬菌柯薩奇病 IgM Ⅰ(間接法二步法)Anti-MARK1 Antibody人甲狀旁腺激相關(guān)蛋白(PTHrP)
葉生布勒擔(dān)子酵母柯薩奇病 IgG Ⅱ(間接法二步法)Anti-MARK3 Antibody人血管緊張原(aGT)
平菇柯薩奇病 IgG Ⅲ(間接法二步法)Anti-MARCKS Antibody人血管緊張原(aGT)
范巴倫氏分支桿菌柯薩奇病 IgG Ⅳ(間接法二步法)Anti-MAS1 Antibody人血管緊張Ⅰ(Ang-Ⅰ)
蘋果黑腐皮殼柯薩奇病 IgG ⅤAnti-MARK4 Antibody人血管緊張Ⅰ(Ang-Ⅰ)
淺白隱球酵母柯薩奇病 IgG Ⅵ(間接法二步法)Anti-MAST2 Antibody人卵泡抑(FS)
大腸埃希氏桿菌合胞病 IgG(間接法二步法)Anti-MAST4 Antibody人卵泡抑(FS)
蠟狀芽孢桿菌合胞病 IgM(間接法二步法)Anti-MASTL Antibody人甲狀腺抗體(TAb)
魯氏接合酵母艾柯病 IgG(間接法二步法)Anti-MASTL Antibody人甲狀腺抗體(TAb)
Notch轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白RBPJK抗體細(xì)黃鏈霉菌鼠頰黏膜鱗癌細(xì)胞
核糖核抑制因子1抗體藤黃色鏈霉菌人纖維肉瘤細(xì)胞系
環(huán)指蛋白41抗體吸水鏈霉菌人直腸癌腫瘤工程細(xì)胞
絲羧肽1抗體灰色鏈霉菌人乳腺癌腫瘤工程細(xì)胞
Src家族抑制劑(PP1)皮落青霉 咖啡酸樺木酯
綠產(chǎn)色鏈霉 Bauerenol acetate
靈芝 Barpisoflavone A
表皮葡萄球 馬兜鈴內(nèi)酰 FI
橄欖色盾殼霉 Aristolactam BII
釀酒酵母 Annonacin
靈芝 Anhydroglycinol
根霉屬 當(dāng)歸堿
米根霉 Alpinumisoflavone acetate
大腸埃希 貓尾草異黃酮
大豆慢生根瘤 麥珠子酸
維及尼鏈霉 澤瀉
中國蜜環(huán) Acantrifoside E
平田頭菇 9β,13β-Epidioxyabiet-8(14)-en-18
大腸埃希 9-Oxoageraphorone