商品介紹:
_beta_-拉帕酮(_beta_-Lapachone)是一種天然的紫檀樹樹皮中得到的醌,,具有抗癌效用,研究顯示是IOD1和Topoiomerase抑制劑,。 注:本品僅可用于科研實驗,,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:4707-32-8 別名:ARQ-501;NSC-26326;NSC-629749;SL-11001;beta-lapachone 純度:99.72% 分子量:242.27 儲存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水),。
2) 對于懸浮細胞,,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,,加入細胞培養(yǎng)液,,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細胞,。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細胞,,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細胞,,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測),。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置,。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,,PI為縱坐標,。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán),。喪失細胞膜完整性的細胞,,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán),。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng),。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
巨大芽胞桿菌Bacillus cereus大鼠白介1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)
沙氏乳桿菌Bacillus megaterium大鼠17羥皮質(zhì)類固(17-OHCS)
茹氏短芽孢桿菌Bacillus pumilus大鼠17羥皮質(zhì)類固(17-OHCS)
柔毛鏈霉菌Bacillus cereus大鼠N-乙酰-β-D-基葡萄糖苷(NAG)
燼灰鏈霉菌Bacillus pumilus大鼠N-乙酰-β-D-基葡萄糖苷(NAG)
糙孢籃狀菌Bacillus subtilis subsp. subtilis大鼠17-類固(17-KS)
居真菌細菌Bacillus licheniformis大鼠17-類固(17-KS)
肺炎克雷伯氏菌鼻硬結(jié)亞種Bacillus thuringiensis大鼠白介2可溶性受體α鏈(IL-2sRα/CD25)
類馬鏈球菌Lysinibacillus sphaericus大鼠白介2可溶性受體α鏈(IL-2sRα/CD25)
釀酒酵母Bacillus cereus大鼠白介2可溶性受體β鏈(IL-2sRβ)
大腸埃希菌Bacillus cereus大鼠白介2可溶性受體β鏈(IL-2sRβ)
NocardiopsisBacillus pumilus大鼠白介3(IL-3)
枯草芽孢桿菌Bacillus megaterium大鼠白介3(IL-3)
黃色鏈霉菌Bacillus cereus大鼠白介5(IL-5)
強酒海桿狀菌Bacillus cereus大鼠白介5(IL-5)
枯草芽胞桿菌Bacillus licheniformis大鼠苗條受體(LR/Ob-R)
細胞質(zhì)內(nèi)的糖基化蛋白抗體熱土厭氧棒菌Actinokineospora diospyrosa
G蛋白信號轉(zhuǎn)導調(diào)節(jié)因子2抗體石油棲熱腔菌脫羧勒克氏菌
Rho相關(guān)蛋白激1抗體食基脫硫弧菌MG溶血性鏈球菌
維甲受體β抗體產(chǎn)纖維二糖梭菌(不提供)血液鏈球菌
IOD1和Topoiomerase抑制劑(β-Lapachone)產(chǎn)氨棒桿 化膽固
葡萄座腔 地膚子皂苷Ic
球孢白僵 膽固乙酸脂
威爾酵母 菊苣酸
鐮刀 麥芽糊精
貝酵母 3-異倒捻子
淡紫擬青霉 甲基-α-D-吡喃半乳糖苷
釀酒酵母 D-葡萄糖酸溶液
芽孢桿 β-倒捻子
氣生玫瑰單胞 甜蜜
類芽孢桿屬 α-倒捻子
黑曲霉 葡糖酸內(nèi)酯
黃曲霉 焦磷酸
草菇 焦磷酸鈉
白假絲酵母 DL-異檸檬酸三鈉鹽