以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
商品介紹:
EHop-016是Rac GTPase高效選擇性抑制劑,在MDA-MB-435細胞中IC50值1.1uM,。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號:1380432-32-5 純度:98.91% 分子量:430.55 儲存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用,。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度,。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水),。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞,。
對于貼壁細胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細胞,共洗滌兩次,。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml,。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測),。
建議設置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置,。結果可用CellQuest等軟件進行分析,,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,,PI為縱坐標,。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán),。喪失細胞膜完整性的細胞,,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán),。
澳型核果褐腐病菌Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides大鼠維生D2(VD2)
FibrellaLeuconostoc lactis大鼠維生E(VE)
鯉鏈霉菌Leuconostoc citreum大鼠維生E(VE)
釀酒酵母Lactobacillus rhamnosus大鼠維生A(VA)
山夫頓堡沙門氏菌Lactobacillus acidophilus大鼠維生A(VA)
匍匐曲霉原變種Lactobacillus casei大鼠β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)
大杯香菇Lactobacillus plantarum大鼠β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)
解脂假絲酵母Lactococcus lactis大鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)
解淀粉芽孢桿菌Streptococcus thermophilus大鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)
Rathayibacter caricisLactococcus lactis subsp. lactis大鼠雙氫睪(DHT)
棒黃曲霉Pediococcus dextrinicus大鼠雙氫睪(DHT)
靈芝Lactobacillus delbrueckii大鼠結締組織生長因子(CTGF)
雞腿菇cc968Streptococcus sp.大鼠結締組織生長因子(CTGF)
越桔假絲酵母Leuconostoc mesenteroides subsp. dextranicum大鼠抗抗體(AsAb)
黑曲霉Propionibacterium acidipropionici大鼠抗抗體(AsAb)
釀酒酵母Enterococcus faecium大鼠甲狀旁腺激(PTH)
視黃結合蛋白抗體密褐褶菌西唐北里孢菌
軸突導向受體蛋白2抗體假芝纖維鏈霉菌
復制激活因子C1抗體皂味口蘑小單孢菌FIM98-0125
鋅指蛋白754抗體松生擬層孔菌(紅緣擬層孔菌)柱銹耳屬
Rac GTPase抑制劑(EHop-016)光帽鱗傘 L-核糖
小腸腸球 白花前胡
大腸埃希氏 酵母聚糖A
高加索鏈霉 花椒
木紫芝 癸基-β-D-硫代吡喃葡萄糖苷
灰號角 常春藤皂苷元
蠟樣芽胞桿 辛基-β-D-硫代吡喃葡萄糖苷
希氏乳桿(希爾加德氏乳桿) D-松
杜搟氏 粘液酸
奇異變形 3-基-β-D-吡喃葡萄糖苷酸環(huán)己鹽
蘇云金芽胞桿蘇云金變種 3-基-β-D-吡喃葡萄糖苷
交鏈孢 可可堿
小單孢 3-基-β-D-吡喃半乳糖苷
葡萄座腔 10-羥基
鹽紅 十二烷基-β-D-麥芽糖苷