以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
泛JAK抑制劑(Pyridone 6) | Pyridone 6 | 1mL(10mM)|1mg|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
公司產品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%,;優(yōu)質胎牛血清,,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,,現用現配,,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng),。
對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
商品介紹:
Pyridone6是一種泛JAK抑制劑,有效抑制JAK激酶家族,,作用于JAK2,,TYK2,JAK3和JAK1,,IC50分別為1nM,,1nM,5nM和15nM,。 注:本品僅可用于科研實驗,,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:457081-03-7 別名:CMP 6;JAK Inhibitor 純度:98.89% 分子量:309.34 儲存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水),。
2) 對于懸浮細胞,,500-1000g離心5min收集細胞,。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,,胰酶消化時間不宜過長或過短,,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,,將細胞輕輕吹打下來,,轉移到離心管內,500-1000g離心5min收集細胞,。
3) 收集細胞后,,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,,共洗滌兩次,。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,,使細胞濃度達到1×106 cell/ml,。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測)。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,,正常細胞組可作為熒光補償調節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置,。結果可用CellQuest等軟件進行分析,,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),FITC為橫坐標,,PI為縱坐標,。Annexin V-FITC和PI聯合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán),。喪失細胞膜完整性的細胞,,細胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán)。
青枯假單胞菌CC趨化因子受體3抗原Anti-CD177 AntibodyRIO激3(RIOK3)
福山淺黃酵母表面趨化因子受體2A抗原Anti-CD1E AntibodyRIO激2(RIOK2)
小葉相思根瘤菌表面趨化因子受體4抗原Anti-CD1B AntibodyRIO激1(RIOK1)
不高雙孢菌表面趨化因子受體6抗原Anti-CD1C AntibodyRififylin蛋白(RFFL)
藍微褐鏈霉菌表面趨化因子受體6抗原Anti-CD200 AntibodyRhoGDP解離抑制因子α(ARHGDIα)
三孢布霉CC趨化因子受體7(多肽)Anti-CD200R1 AntibodyRho蛋白2(RHPN2)
球孢白僵菌CXCL10趨化因子10/干擾誘導蛋白10抗原Anti-CD200R1 AntibodyRho蛋白1(RHPN1)
食砜節(jié)桿菌血管內皮生長因子(多肽抗原)Anti-CD209 AntibodyRhotekin2蛋白(RTKN2)
新城疫病CD10抗原Anti-CD226 AntibodyRhotekin蛋白(RTKN)
串珠鐮孢ZCWCC1抗原Anti-CD276 AntibodyRET原癌基因(RET)
釀酒酵母多配體蛋白聚糖1抗原Anti-CD3 zeta AntibodyREST輔抑制因子3(RCOR3)
中國蜜環(huán)菌黑色瘤粘附分子CD146抗原Anti-CD300C AntibodyREST輔抑制因子2(RCOR2)
血耳*肽N抗原Anti-CD302 AntibodyREST輔抑制因子1(RCOR1)
釀酒酵母CD14/內受體抗原Anti-CD300E AntibodyReprimo蛋白(RPRM)
果生鏈核盤菌CD28抗原Anti-CD300LG AntibodyRepetin蛋白(RPTN)
ATCC 12980活化白粘附分子抗原Anti-CD300LF AntibodyRecepin蛋白(CIR)
泛激3抗體SphingomonasyunnanensisKM小鼠腦神經膠質母細胞瘤瘤株
蛋白激活受體4抗體Massiliaaerilata人視網膜母細胞瘤
早老γ分泌2抗體多黏類芽孢桿菌人肺癌細胞(淋巴結轉移)
絲/蘇蛋白激PIM3抗體紡綞形賴芽孢桿菌豬小腸上皮細胞
泛JAK抑制劑(Pyridone 6)*簡單類諾氏 (+)-Puerol B 2"-O-glucoside
大腸埃希 Clausine Z
土壤伊薩酵母 (E)-2-[3,4-雙(乙酰氧基)苯基]乙基 3-O-(2,3,4,6-四-O-乙?;?BETA-
盤長孢狀盤孢 Yuehgesin C
鐮刀 黃腐 D
燕麥嗜酸西瓜亞種* 中國臺灣三尖杉堿
總狀共頭霉(可訂購) Wilforol C
梅林青霉 葡萄 D
紫色紅曲 喜果苷
細孢毛霉 Uvedalin
葉生布勒擔子酵母 鉤藤甙元 C
金針菇雜19 Tupichilignan A
日本曲霉 雷藤二萜醌 B
無乳鏈球 Triptocallic acid D
Burkholderia stabilis Vandamme et al. Triptocallic acid A