商品介紹:
本試劑盒適用于測定哺乳動物組織,、細(xì)胞caspase-1活性,。測定原理基于Caspase-1特異水解其多肽底物N-acetyl-Tyr-Val-Ala-Asp-pNA(Ac-YVAD-pNA),,釋放出游離的硝基pNA,,后者呈黃色在405nm具有大吸收峰,用可見光分光光度比色方法測定,。其吸光度值對應(yīng)于Caspase-1的水解活性,。 細(xì)胞凋亡屬于程序化細(xì)胞死亡,可見于各種器官和細(xì)胞,,在正常發(fā)育,、生理、病理過程中對細(xì)胞和器官的穩(wěn)態(tài)具有十分重要的調(diào)節(jié)作用,。Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是參與細(xì)胞凋亡過程的蛋白酶家族,,包含10多個成員。其中Caspase-1是可剪切IL-1b和IL-18前體產(chǎn)生活性細(xì)胞因子的caspase,。Caspase-11剪切45kD的caspase-1前體蛋白產(chǎn)生20kD和10kD片斷,,這兩個片斷可以形成異源二聚體,并進(jìn)一步形成四聚體,。此四聚體具有蛋白酶活性,。Caspase-1通過剪切Bcl-XL調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡,并通過對細(xì)胞因子前體的剪切來調(diào)控相關(guān)細(xì)胞因子介導(dǎo)的免疫炎性反應(yīng),。 運輸及保存:試劑常溫運輸,。到達(dá)后按要求儲存,,1年內(nèi)穩(wěn)定,。 所需儀器:酶標(biāo)儀與96孔酶標(biāo)板;或可見光分光光度計配100μl容積的石英比色杯。 工作波長:大吸收波長405nm,,如不具備也可在400~450nm范圍內(nèi)測定,,但靈敏度略降。 |
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:Caspase-1活性測定試劑盒
英文名稱:Caspase 1 Activity colorimetric assay Kit
產(chǎn)品規(guī)格:20T|50T|100T
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核,、染色體以及基因表達(dá)的研究,;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究,;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控,;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡),;
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化,;
⑧細(xì)胞工程.
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1,、無菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,最后將1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化,;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,,1200r/min 離心10min,,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5,、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二,、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h,;
6、用PBS沖洗3次,,每次10min,,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1,、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,,需根據(jù)細(xì)胞的大小,,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定),。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物,。
3、將96孔板在37℃,,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間,。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液,。
5,、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,,使MTT 還原為甲臜,。
6、吸出上清液,,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,,用平板搖床搖勻。
7,、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8,、結(jié)果分析
a,、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,,無細(xì)胞),,各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b,、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
蝶呤(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fluoxetine Hydrochloride8號染色體開放閱讀框4抗體包裝100g
蝶呤二鈉鹽 (標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fluvoxamine maleateCD73抗體包裝25g
磺丁脲(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fluvoxamine maleate軸突相關(guān)粘附分子抗體包裝500g
咪唑英文名稱: Formestane6型膠原蛋白α5抗體包裝1g
咪唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Formestane神經(jīng)粘附分子CALL抗體包裝5g
芬那(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fosinopril sodium中性粒殺菌蛋白BP30抗體包裝100ml
砜霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Furosemide21號染色體開放閱讀框56抗體包裝500ml
鈷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: FurosemideT淋巴CD1抗體包裝50ml
磺地平(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Gemfibrozil角蛋白5抗體包裝100g
磺倍他司?。?biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Gemfibrozil補體C9a抗體包裝25g
磺達(dá)沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Gliclazide20號染色體開放閱讀框141抗體包裝1g
磺多拉司瓊(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Gliclazide20號染色體開放閱讀框160抗體包裝5g
磺多沙唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Glyburide/Gliebenclamide親環(huán)蛋白(親環(huán))40抗體包裝100g
磺酚妥拉明(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Glyburide/GliebenclamideT調(diào)控相關(guān)蛋白抗體包裝25g
磺吉米沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Glimepiride突觸后蛋白CRIPT抗體包裝5g
白靈側(cè)耳(白靈菇)Pleurotus│nebrodensis 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品相撲結(jié)合UBC9試劑盒無檸檬;Citric acid
季也蒙畢赤酵母Pichia│guilliermondii 質(zhì)量規(guī)格:干品純度≥90.0%,干品含量≥85.0%,,USP34腺嘌呤核苷轉(zhuǎn)運蛋白試劑盒文多靈;Vindoline
pTargetFpTargetF 質(zhì)量規(guī)格:含量測定腺苷脫試劑盒五味子;Schisandrin
Caspase-1活性測定試劑盒北方蜜環(huán) 美拉諾坦半胱氨酸蛋白9Elisa
釀酒酵母 17-AAG載脂蛋白E2Elisa
鏈霉 3-氯-4-氟苯甲糖類抗原Elisa
白地霉 Bovine adrenal medulla dodecapeptide血小板衍生生長因子AAElisa
天藍(lán)褐鏈霉 4-氟-3-硝基氯芐真核翻譯起始因子4E結(jié)合蛋白1Elisa
釀酒酵母 2-甲氧基-3-連接橋粒斑珠蛋白Elisa
大腸埃希 Regorafenib (BAY 73-4506)抗鏈球溶血0Elisa
膠孢 [Arg8]-Vasotocin acetate saltF肌動蛋白Elisa
pET-23a NVP-AUY922Talin-1Elisa
馬賽 2-甲氧基-3-硝基吡啶δ-維生EElisa
堅強芽孢桿 雙(2-甲氧乙基)氨基三氟化硫(BAST)γ-維生EElisa
擬雷氏日歸殼 1H-1,2,3-三氮唑-4-鹽酸鹽α-維生EElisa
陰溝腸桿 3,5-二氯-2-硝苯β-胡蘿卜Elisa
腸膜明串珠 -氟-4-甲基-5-硝苯黃體生成釋放Elisa
圓弧青霉 2-氯-3-氟-4-羥基吡啶溶體相關(guān)膜蛋白2抗體Elisa