微管蛋白聚合抑制劑(Dolastatin 10)公司*的產(chǎn)品：TNK1/FITC 熒光標(biāo)記受體型酪氨蛋白激Tnk1抗體IgG
Phospho-TNK1 (Tyr277)/FITC 熒光標(biāo)記化受體型酪氨蛋白激Tnk1抗體IgG
Phospho-Tyk2 (Tyr1054/1055)/FITC 熒光標(biāo)記化受體酪氨蛋白激2抗體IgG
Tyk2/Non receptor tyrosine pr

產(chǎn)品屬性：

中文名稱：微管蛋白聚合抑制劑(Dolastatin 10)

英文名稱：Dolastatin 10

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|5mg

發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研

商品介紹：

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：

細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細(xì)胞核,、染色體以及基因表達(dá)的研究；

②生物膜與細(xì)胞器的研究,；

③細(xì)胞骨架體系的研究,；

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控,；

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡),；

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；

⑧細(xì)胞工程.

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一,、分離與培養(yǎng)：

1,、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，最后將1mm3左右大?。?/span>

2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；

3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；

二、免疫熒光鑒定：

1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；

3,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；

6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

貝倫格葡萄座腔菌梨生?；?/span>Bacillus pumilus大鼠基質(zhì)金屬蛋白7(MMP-7)

枯草芽胞桿菌枯草亞種Bacillus pumilus大鼠基質(zhì)金屬蛋白8/中性粒膠原(MMP-8)

豬鏈球菌Bacillus cereus大鼠基質(zhì)金屬蛋白8/中性粒膠原(MMP-8)

白地霉Bacillus firmus大鼠5核苷(5-NT)

塔賓曲霉Bacillus cereus大鼠5核苷(5-NT)

聚生殼菌Brevibacillus brevis大鼠骨保護(hù)(OPG)

香菇Bacillus globisporus大鼠骨保護(hù)(OPG)

多主殼菌Brevibacillus brevis大鼠B因子(BF)

嗜熱鏈球菌Bacillus circulans大鼠B因子(BF)

穗狀平臍蠕孢Bacillus subtilis subsp. subtilis大鼠抑瘤M(OSM)

杜柱隔孢Lysinibacillus sphaericus大鼠抑瘤M(OSM)

腫紅皮孔菌Bacillus thuringiensis大鼠胎盤生長(zhǎng)因子(PLGF)

貝氏不動(dòng)桿菌Bacillus thuringiensis大鼠胎盤生長(zhǎng)因子(PLGF)

纖維單胞菌屬Bacillus thuringiensis大鼠正常T表達(dá)和分泌因子(RANTES/CCL5)

Bacillus  weihenstephanensisBacillus thuringiensis大鼠正常T表達(dá)和分泌因子(RANTES/CCL5)

截形炭團(tuán)菌Bacillus thuringiensis大鼠L解(PAL)

活性氧簇ROS抗體蘇云金芽胞桿菌明尼蘇達(dá)沙門氏菌

衰老標(biāo)記蛋白30抗體邊緣假單胞菌傷寒沙門氏菌鏈霉依賴株

成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤基因抗體纖維化纖維微細(xì)菌布丹沙門氏菌

軸突導(dǎo)向受體抗體香魚假單胞菌尼婁斯沙門氏菌
微管蛋白聚合抑制劑(Dolastatin 10)硬水黃桿 葡萄糖酸亞鐵

水叢毛單胞 檸檬酸鋅

黑曲霉 L-乳酸

貝特氏 青陽(yáng)參苷元A

大腸埃希 甜菊苷

香菇(泌陽(yáng)1號(hào)) D-葡萄糖酸內(nèi)酯

紫芝 D-葡萄糖酸

蝙蝠蛾擬青霉 告達(dá)亭苷元

玉蜀黍平臍蠕孢 四乙酰核糖

香菇 川陳皮

假單胞屬 4-甲基傘形酮酰-β-D-吡喃葡糖酸苷

藤黃灰鏈霉 石杉?jí)A甲

黃柄曲霉 4-甲基傘形酮酰-α-D-吡喃糖苷

擬盤多毛孢 4-甲基傘形酮酰-β-D-吡喃糖苷

矩圓黑盤孢 豆腐果苷 

操作規(guī)程

1,、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）,。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2,、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3,、將96孔板在37℃,，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4,、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液,。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜,。

6,、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻,。

7,、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）,。

8,、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT,，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD,。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值,。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b,、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)