以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
AG555是一種EGFR酪氨酸激酶抑制劑,。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號(hào):133550-34-2 別名:Tyrphostin AG 555 純度:98.0% 分子量:322.36 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存,。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,,500-1000g離心5min收集細(xì)胞,。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次,。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml,。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)),。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置,。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),,F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),,PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán),。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán),。
小鼠腫瘤壞死因子配體超家族成員13(TNFSF13)ELISA試劑盒 ,,英文名: TNFSF13 ELISA Kit
犬葉酸(FA)ELISA檢測(cè)試劑盒CanineFolicacid,FAELISAKit 96T/48T
犬腎素(Renin)免疫試劑盒 Canine Renin ELISA Kit
英文名稱HumanPCNAELISAKit人增殖細(xì)胞抗原(PCNA)規(guī)格:96T/48T
陳舊血紅細(xì)胞溶解液500毫升
Ratheatshockprotein70,hSP-70ELISA試劑盒大鼠熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠白介素17(IL-17)ELISA試劑盒 ,英文名: IL-17 ELISA Kit
大鼠白細(xì)胞活化黏附因子(ALCAM)ELISA檢測(cè)試劑盒RatActivatedLeukocyteCellAdhesionMolecule,ALCAMELISAKit 96T/48T
人SMAD2 免疫試劑盒 Human SMAD2 ELISA Kit
英文名稱MouseFXELISAKit小鼠凝血因子X(jué)(FX)規(guī)格:96T/48T
VMA高效液相色譜電化學(xué)定量檢測(cè)試劑盒20次
Rabbitplasmin-aiplasmincomplex,PAPELISA試劑盒兔纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
豬免疫球蛋白G(IgG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human thyroxine aibody (TAb) ELISA Kit 人甲狀腺素抗體(TAb)ELISA試劑盒
Guineapigierleukin4,IL-4ELISAKit 豚鼠白介素4(IL-4)ELISA試劑盒 96T/48T 分裝
CLIAKitforAMPKELISAKit大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶規(guī)格:48T/96T
血液瓜氨酸含量比色法定量檢測(cè)試劑盒20次
PorcineAngiopoietin2,ANG-2ELISAKit豬血管生成素2(ANG-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
EGFR酪氨酸激酶抑制劑(AG 555)5-lipoxygenase activating protein 英文名稱: 5脂氧合酶激活蛋白抗體 0.2ml
FBXO39 英文名稱: XIAP相關(guān)因子1凋亡抑制蛋白抗體 0.1ml
基質(zhì)金屬蛋白酶-3抗體 Anti-MMP-3 0.1ml
Anti-SAMDC/AMD1/FITC 熒光素標(biāo)記S-腺苷蛋氨酸脫羧酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-PDGFRA(Tyr988) 磷酸化血小板源性生長(zhǎng)因子受體α 規(guī)格 0.1ml
ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Dap22) ??窠?jīng)毒素(35肽)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1mg