以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,5%,。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存,。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
商品介紹:
Dipyridamole(Persantine)是磷酸二酯酶抑制劑,,能阻斷紅細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)腺苷的吸收和代謝,。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號(hào):58-32-2 純度:99.14% 分子量:504.63 儲(chǔ)存條件:-20℃,,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用,。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水),。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞,。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細(xì)胞,。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細(xì)胞,,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細(xì)胞,,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)),。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置,。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),,PI為縱坐標(biāo),。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,,細(xì)胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán)。
蛋白激活受體3(PAR3)ELISA Kit英文名稱:PAR3 ELISA Kitα1-chimaerin蛋白抗體包裝25g
蛋白激活受體2(PAR2)ELISA Kit英文名稱:PAR2 ELISA Kit信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白9復(fù)合體7b抗體包裝5g
蛋白3(PR3)ELISA Kit英文名稱:PR3 ELISA Kit鈣調(diào)神經(jīng)磷調(diào)節(jié)蛋白1抗體(唐氏綜合征候選區(qū)域蛋白1樣蛋白1)包裝1g
蛋白磷3調(diào)節(jié)因子亞基1(PPP3R1)ELISA Kit英文名稱:PPP3R1 ELISA Kit鈣調(diào)神經(jīng)磷調(diào)節(jié)蛋白3抗體(唐氏綜合征候選區(qū)域蛋白1樣蛋白3)包裝5g
蛋白酪磷受體O(PTPRO)ELISA Kit英文名稱:PTPRO ELISA KitCentaurin α1抗體包裝1g
蛋白酪磷受體H(PTPRH)ELISA Kit英文名稱:PTPRH ELISA KitB淋巴白血病/淋巴瘤11/鋅指蛋白856抗體包裝5g
蛋白激抑制因子γ(PKIγ)ELISA Kit英文名稱:PKIγ ELISA KitB淋巴白血病/淋巴瘤11B抗體包裝25g
蛋白激抑制因子β(PKIβ)ELISA Kit英文名稱:PKIβ ELISA Kit鈣平衡調(diào)節(jié)蛋白1抗體包裝5g
蛋白激N2(PKN2)ELISA Kit英文名稱:PKN2 ELISA Kit阿爾茨海默病淀粉樣蛋白相關(guān)膠原蛋白抗體包裝100mg
蛋白激D1(PRKD1)ELISA Kit英文名稱:PRKD1 ELISA Kit老年癡呆相關(guān)類鈣粘蛋白CS1抗體包裝1g
蛋白激Cη(PKCη)ELISA Kit英文名稱:PKCη ELISA Kit凋亡誘導(dǎo)蛋白NALP3抗體包裝25g
蛋白激Cζ(PKCζ)ELISA Kit英文名稱:PKCζ ELISA Kit豬圓環(huán)?、蛐鸵職さ鞍卓贵w包裝5g
蛋白激Cε(PKCε)ELISA Kit英文名稱:PKCε ELISA Kit血管加壓激活鈣啟動(dòng)受體蛋白1抗體包裝25g
蛋白激Cδ(PKCδ)ELISA Kit英文名稱:PKCδ ELISA Kit干生長(zhǎng)因子受體/表面分化抗原抗體包裝5g
蛋白激Cα相互作用蛋白1(PICK1)ELISA Kit英文名稱:PICK1 ELISA Kit離子通道蛋白6抗體包裝1g
根瘤菌Rhizobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:purity>99.0%,BR魚精蛋白1試劑盒葉黃;Xanthophyll
粗壯假絲酵母Candida│valida 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品誘導(dǎo)型一氧化氮合成試劑盒愈創(chuàng)木酚;Guaiacol
: Charwoman資源名稱: 鏈球菌 質(zhì)量規(guī)格:含量>99.0%有絲分裂原活化蛋白激14試劑盒異丁香酚;Isoeugenol
磷酸二酯酶抑制劑(Dipyridamole)兔抗雞IgG抗血清雙(3--1--5-吡唑啉)[用于硝棉,維生B12等的測(cè)定] Bis(3-methyl-1-phenyl-5-pyrazolone) [for Determination of CN, Vitamin B12, etc]>97.0%(T)Human, Mouse, Rat
兔抗雞IgM抗血清2-并惡唑 2-Benzoxazolinone >98.0%(GC&T)Human, Mouse, Rat
兔抗狗IgG抗血清雙(4-)二硫 Bis(4-nitrophenyl) Disulfide >95.0%(GC)Human, Mouse, Rat
兔抗羊IgM抗血清雙(2-)二硫 Bis(2-nitrophenyl) Disulfide >98.0%(GC&N)Human, Mouse, Rat
兔抗豚鼠IgG抗血清雙(2-)二硫 Bis(2-nitrophenyl) Disulfide >98.0%(GC&N)Human, Mouse, Rat
兔抗豚鼠IgM抗血清三酯 Trimethyl Borate >97.0%(T)Human
兔抗人IgG抗血清三酯 Trimethyl Borate >97.0%(T)Human
兔抗人IgM抗血清三異酯 Triisopropyl Borate >98.0%(T)Human, Mouse, Rat
兔抗猴IgG抗血清三異酯 Triisopropyl Borate >98.0%(T)Human, Mouse