以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
GRK2抑制劑(GSK180736A) | GSK180736A | 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,,5%,。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲(chǔ)存,。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
GSK180736A是G蛋白偶聯(lián)受體激酶2(GRK2)的抑制劑,,IC50值為0.77μM,。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號(hào):817194-38-0 純度:98.05% 分子量:365.36 儲(chǔ)存條件:-20℃,,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用,。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水),。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細(xì)胞,。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細(xì)胞,,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細(xì)胞,,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)),。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置,。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),,PI為縱坐標(biāo),。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán),。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
泛(Ub)ELISA Kit英文名稱:Ub ELISA Kit原癌基因CD39樣蛋白4抗體包裝100g
泛醌C還原核心蛋白Ⅱ(UQCRC2)ELISA Kit英文名稱:UQCRC2 ELISA Kit膠原樣蛋白抗體包裝500g
翻譯調(diào)節(jié)腫瘤蛋白1(TPT1)ELISA Kit英文名稱:TPT1 ELISA Kit腫瘤易感性候選基因5抗體包裝5g
法尼酯X受體(FXR)ELISA Kit英文名稱:FXR ELISA Kit鈣調(diào)蛋白激激β抗體包裝1g
二?;视?/span>(DAG)ELISA Kit英文名稱:DAG ELISA Kit中心體肌動(dòng)蛋白γ1/增強(qiáng)型PI3K蛋白抗體包裝5g
二酰甘油-O-?;D(zhuǎn)移同源物1(DGAT1)ELISA Kit英文名稱:DGAT1 ELISA Kit分裂周期相關(guān)蛋白JPO2抗體包裝100g
二肽基肽Ⅳ(DPP4)ELISA Kit英文名稱:DPP4 ELISA Kit半胱蛋白-2抗體包裝25g
二肽基肽9(DPP9)ELISA Kit英文名稱:DPP9 ELISA Kit7號(hào)染色體開放閱讀框63抗體包裝25g
二肽基肽8(DPP8)ELISA Kit英文名稱:DPP8 ELISA KitCD2結(jié)合蛋白3抗體包裝5g
二氫乳清脫氫(DHODH)ELISA Kit英文名稱:DHODH ELISA Kit膠原三股螺旋重復(fù)蛋白1抗體包裝5g
二氫嘧啶脫氫(DPYD)ELISA Kit英文名稱:DPYD ELISA Kit20號(hào)染色體開放閱讀框72抗體包裝100g
二氫硫辛轉(zhuǎn)乙酰基(DLAT)ELISA Kit英文名稱:DLAT ELISA Kit2號(hào)染色體開放閱讀框6抗體包裝25g
二氫硫辛脫氫(DLD)ELISA Kit英文名稱:DLD ELISA KitCD318抗體包裝5g
二級(jí)淋巴組織趨化因子(SLC)ELISA Kit英文名稱:SLC ELISA Kit著絲粒蛋白B抗體包裝25g
兒茶酚-O-基轉(zhuǎn)移(COMT)ELISA Kit英文名稱:COMT ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框111抗體包裝5g
谷棒桿菌Corynebacterium│glutamicum 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品孕受體試劑盒延胡索;Corydaline
傳染性法氏囊病病毒禽雙RNA病毒屬│ 質(zhì)量規(guī)格:USP,進(jìn)分sigmaD8809 孕和adipoQ 受體家族成員Ⅶ試劑盒月桂氮卓;Laurocapram
大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%,BR,可用于培養(yǎng)孕激誘導(dǎo)阻斷因子試劑盒油;cis-9-Octadecenoi
GRK2抑制劑(GSK180736A)突觸樣蛋白5亞型2抗體5,7-二氧芹菜定 DIMETHOXYAPIGENINIDIN, 5,7-(SH)Human, Mouse
絲合并蛋白3抗體(腫瘤差異表達(dá)蛋白)5-羥-4’,7-二氧黃 DIMETHOXYAPIGENIN, 4',7-(RG)(PLEASE CALL)Human, Mouse
Smad核轉(zhuǎn)錄共抑制因子抗體DIVINYL-PROTOCHLOROPHYLLIDE (SH)Human
SET易位蛋白/髓系白血病相關(guān)蛋白抗體二異 DI-ISOPROPYLKETONE(SG)Human
SET易位蛋白/髓系白血病相關(guān)蛋白抗體二-D-葡萄糖 DI-O-ISOPROPYLIDENE-a-D-GLUCOFURANOSE, 1,2,5,6-(RG)Human
絲/蘇/酪激STYK1抗體5,7-二氧黃烷 DIMETHOXYFLAVANONE,5,7-(RG)Human
鈉通道蛋白11α抗體4,4'-二氧查耳 DIMETHOXYCHALCONE,4,4'-(RG)Human, Mouse
鈉離子通道β1抗體4,4'-二氧查耳 DIMETHOXYCHALCONE,4,4'-(RG)Human, Mouse, Rat
導(dǎo)向蛋白3B抗體3,4-二氧查耳 DIMETHOXYCHALCONE,3,4-(RG)Human, Mouse