產品屬性:
中文名稱:Caspase-3活性測定試劑盒
英文名稱:Caspase-3 Activity colorimetric assay Kit
產品規(guī)格:20T|50T|100T
發(fā)貨周期:1~3天
公司產品僅用于科研
商品介紹:
本試劑盒適用于測定哺乳動物組織,、細胞caspase-3活性。測定原理基于Caspase-3特異水解多肽底物acetyl-Asp-Glu-Val-Asp p-nitroanilide(Ac-DEVD-pNA),,釋放硝基pNA,。游離硝基pNA呈黃色在405nm具有大吸收峰,用普通可見光分光光度比色方法測定,。根據pNA標準管吸光度OD值和標準曲線,,計算來自底物肽釋放的pNA濃度,得到Caspase-3水解活性,。 Caspase-3是凋亡過程中主要的終末剪切酶,,因而也是研究多的caspase,它激活pro-caspase-2,6,7,9等,,特異水解多種凋亡關鍵蛋白如PARP,,介導細胞核染色質固縮、凋亡小體生成,、核DNA斷裂,。 運輸及保存:試劑常溫運輸。到達后按要求儲存,1年內穩(wěn)定,。 所需儀器:酶標儀與96孔酶標板,;或可見光分光光度計配100μl容積的石英比色杯。 工作波長:大吸收波長405nm,,如不具備也可在400~450nm范圍內測定,,但靈敏度略降。 |
細胞生物學研究有以下幾個方面:
細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括:
①細胞核,、染色體以及基因表達的研究,;
②生物膜與細胞器的研究;
③細胞骨架體系的研究,;
④細胞增殖及其調控,;
⑤細胞分化及其調控;
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡),;
⑦細胞的起源與進化,;
⑧細胞工程.
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1,、無菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,最后將1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,,直至組織*被消化,;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,,1200r/min 離心10min,,棄去上清,,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5,、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2,、PBS沖洗細胞2次,,每次10min,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3、PBS沖洗細胞2次,,每次10min,,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min,;
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,;
5,、PBS沖洗細胞3次,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h;
6,、用PBS沖洗3次,,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
磺二嘧啶 (標準品)英文名稱: Oseltamivir phosphate 凝集蛋白家族11抗體包裝1g
磺二氧基嘧啶(標準品)英文名稱: Oseltamivir phosphate 銅代謝結構域蛋白1抗體包裝5g
磺惡唑(標準品)英文名稱: Dibucaine HCl20號染色體開放閱讀框96抗體包裝25g
磺基嘧啶(標準品)英文名稱: Donepezil 3號染色體開放閱讀框26抗體包裝5g
磺氧噠(標準品)英文名稱: Doripenem 粘附分子2抗體包裝25g
磺間二氧嘧啶鈉(標準品)英文名稱: Doripenem 耳聾-狀腺腫綜合征相關COBL蛋白抗體包裝5g
磺間氧嘧啶(標準品)英文名稱: Doxapram Hydrochloride20號染色體開放閱讀框195抗體包裝1g
磺脒(標準品)英文名稱: Doxapram Hydrochloride7號染色體開放閱讀框62抗體包裝1g
磺嘧啶(標準品)英文名稱: Doxylamine succinate9號染色體開放閱讀框174抗體包裝1g
磺嘧啶鈉(標準品)英文名稱: Doxylamine succinate6號染色體開放閱讀框64抗體包裝25g
磺嘧啶銀(標準品)英文名稱: Drospirenone免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ抗體包裝5g
磺噻唑(標準品)英文名稱: Drospirenone透明質介導游走受體抗體包裝1g
磺異噁唑(標準品)英文名稱: Ethiny Estradiol周期樣Y1抗體包裝5g
磺芐西林(標準品)英文名稱: Ethiny Estradiol周期J抗體包裝100ml
磺草靈(標準品)英文名稱: Ethionamide周期L抗體包裝25g
小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質量規(guī)格:>98%,BR心肌肌鈣蛋白Ⅰ試劑盒吳茱萸內酯;Evodine
地衣芽孢桿菌Bacillus│licheniformis 質量規(guī)格:>98%,BP協同激分子受體試劑盒五味子;Schisandrin C
鏈狀假絲酵母Candida│catenulata 質量規(guī)格:HPLC>98%,標準品小而密低密度脂蛋白試劑盒五味子乙;schisandrol B
Caspase-3活性測定試劑盒虎皮粘蓋牛肝 2-氨基-3-甲基-5-氯吡啶產幽門螺桿抗體IGGElisa
枯草芽孢桿 乙酰酮化鈰(III) 水合物二酰Elisa
松針散斑殼 醋酸氯己定琥珀酰Elisa
枯草芽孢桿 4-氟-2-(三氟甲基)溴芐傷寒IgM抗體Elisa
大腸埃希氏 異丁酸香蘭酯跨膜蛋白97Elisa
嚙蝕艾肯氏 5-溴-2-間二甲苯絲酸酮酸氨基轉移Elisa
星孢鏈霉 2,5-二氯肉桂酸胖Elisa
大腸埃希氏桿 4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯;4-甲基-5-乙氧羰基噻唑脂肪因子Elisa
凝結芽孢桿 D-焦谷氨酸叔丁酯1,3-Elisa
蘇云金芽孢桿 1-Boc-2-羥甲基哌1,2-Elisa
枯草芽孢桿 5-氯苯并噻吩核糖核酸LElisa
產氨棒桿 1-溴-4-異丁基苯甲血清白蛋白結合物Elisa
釀酒酵母 3-苯甲酰酸內皮受體AElisa
紅球 D-葡糖酸-gamma-內酯酮內皮受體BElisa
挪威假絲酵母 4-異基芐氯Tafazzin蛋白Elisa
操作規(guī)程
1,、在96孔板加入細胞100μL/孔,,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,,需根據細胞的大小,,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2,、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物,。
3、將96孔板在37℃,,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間,。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液,。
5,、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,,使MTT 還原為甲臜,。
6、吸出上清液,,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,,用平板搖床搖勻。
7,、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8,、結果分析
a,、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,,無細胞),,各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,,T 為加藥細胞的OD 值,,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b,、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)