產(chǎn)品屬性:
中文名稱:MEK抑制劑(Refametinib)
英文名稱:Refametinib
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹:
Refametinib(RDEA119,BAY86-9766)是MEK抑制劑,,對MEK1和MEK2的IC50分別為19nM和47nM,有抗腫瘤活性。 注:本品僅可用于科研實驗,,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號:923032-37-5 別名:BAY 869766;BAY 86-97661;RDEA119 純度:98.46% 分子量:572.34 儲存條件:-20℃,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用,。 |
細胞生物學(xué)研究有以下幾個方面:
細胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細胞核、染色體以及基因表達的研究,;
②生物膜與細胞器的研究,;
③細胞骨架體系的研究;
④細胞增殖及其調(diào)控,;
⑤細胞分化及其調(diào)控,;
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細胞的起源與進化,;
⑧細胞工程.
實驗報告:
一,、分離與培養(yǎng):
1,、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,最后將1mm3左右大小,;
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,,1200r/min 離心10min,棄去上清,,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二,、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細胞2次,,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,;
2,、PBS沖洗細胞2次,,每次10min,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3、PBS沖洗細胞2次,,每次10min,,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min,;
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,;
5,、PBS沖洗細胞3次,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h;
6,、用PBS沖洗3次,,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
萬壽菊鏈格孢一氧化氮合成-2(抗原)Anti-C6 AntibodyT-框蛋白3(TBX3)
乳乳球菌乳亞種蛇巴曲抗原Anti-CA1 AntibodyT-框蛋白21(TBX21)
乳乳球菌一氧化氮合成-3(抗原)Anti-CA12 AntibodyT-框蛋白2(TBX2)
豌豆根瘤菌神經(jīng)肽 Y(抗原)Anti-CA12 AntibodyT-框蛋白1(TBX1)
鏈霉菌谷受體(抗原)Anti-CA13 AntibodyTwist轉(zhuǎn)錄因子(TWIST)
紅酵母屬神經(jīng)生長因子-3(抗原)Anti-CA13 AntibodyTwist鄰位子(TWISTNB)
綠曲霉神經(jīng)生長因子4/5(抗原)Anti-CA13 AntibodyTsukushin蛋白(TSK)
叢毛單胞菌神經(jīng)生長因子(抗原)Anti-CA14 AntibodytRNA異戊基轉(zhuǎn)移1(TRIT1)
藤黃輪絲鏈霉菌Bcl-xL蛋白抗原Anti-CA14 AntibodytRNA磷轉(zhuǎn)移1(TRPT1)
擬金發(fā)蘚黏液桿菌磷化(Ser62)Bcl-xL蛋白抗原Anti-CA14 AntibodyTrihydrophobin1蛋白(TH1)
佛雷德里克斯堡假單胞菌丁酰脂抗原(N端)Anti-CA181 AntibodyTricellulin蛋白(TRIC)
木賊鐮孢丁酰脂抗原(C端)Anti-CA4 AntibodyTOPBP1相互作用復(fù)制激蛋白(Treslin)
白地霉核受體相關(guān)因子-1(抗原)Anti-CA5A AntibodyTomoregulin1蛋白(TR1)
血球叢赤殼胞漿-5′-核苷-ⅡAnti-CA5A AntibodyTomoregulin蛋白(TR)
熱帶假絲酵母一種抑癌基因(多肽)Anti-CA5B AntibodyToll樣受體銜接分子1(TICAM1)
蠟狀芽胞桿菌成骨生長肽 (骨生長激肽)(蛋白多肽)Anti-CA5B AntibodyToll樣受體9(TLR9)
原鈣粘附蛋白α4抗體居海洛克氏菌大鼠胰島細胞瘤細胞
原鈣粘附蛋白α5抗體Aquimarinamuelleri小鼠海馬神經(jīng)元細胞系
原鈣粘附蛋白α9抗體Shimiaisoporae人胃腺癌細胞
原鈣粘附蛋白α7抗體香港洛克氏菌甲狀腺乳頭狀細胞癌
MEK抑制劑(Refametinib)匍匐曲霉原變種 瓊脂粉
雪白紅鏈霉 二苯硫酸鹽
草螺屬 沒食子蘭
無氧芽孢桿 蛋黃
矩圓黑盤孢 大豆
哈茨木霉 大豆
紅色蠟?zāi)?/span> 雙(4-基)磷酸酯
邊緣假單胞 四甲基氟化(四水)
露濕漆斑 三癸酸三酯
麥芽香肉桿 脫脂奶粉
芽孢桿屬 I型核酸染色劑
谷棒桿Ⅲ型 十九酸
果生鏈核盤 2,2,6,6-四甲基-1-酮
暗黑橄欖色鏈霉 苯甲基-2-磺酰三硝基三氮唑
尼泊爾德巴酵母 對苯二甲酸單甲酯
操作規(guī)程
1,、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定),。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物,。
3,、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間,。
4,、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5,、每孔加50μL 1× MTT 溶液,,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜,。
6,、吸出上清液,,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻,。
7,、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片),。
8,、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD,。細胞的存活率以T/C%表示,,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值,。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b,、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)