商品介紹:
SC-514(GK01140)是IKK-2特異性抑制劑,IC50為11.2uM,對IKK其它亞型或別的絲氨酸-蘇氨酸和酪氨酸激酶無抑制性,。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:354812-17-2 別名:GK 01140 純度:99.99% 分子量:224.3 儲存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水),。
2) 對于懸浮細胞,,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,,加入細胞培養(yǎng)液,,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細胞,。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細胞,,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細胞,,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測),。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置,。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,,PI為縱坐標,。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán),。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán),。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,5%,。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存,。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng),。
對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
土壤貪噬菌人激動異構(gòu)/分裂MBBacillus licheniformis小鼠Toll樣受體9(TLR-9/CD289)
糞腸球菌人肌球蛋白輕鏈激Bacillus licheniformis小鼠鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)
葡萄座腔菌人硫轉(zhuǎn)移pi基因Bacillus licheniformis小鼠鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)
大腸埃希氏菌人S轉(zhuǎn)移Bacillus licheniformis小鼠生長激釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)
擬莖點霉屬人泛分解Bacillus licheniformis小鼠生長激釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)
假單胞菌人分泌型磷脂A2Bacillus licheniformis小鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲蛋白抑制劑(vaspin)
水生黃桿菌人泛連接Bacillus licheniformis小鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲蛋白抑制劑(vaspin)
裂褶菌 人肥大類Bacillus licheniformis小鼠溴脫氧核苷(BrdU)
栓菌人多巴色異構(gòu)Bacillus licheniformis小鼠溴脫氧核苷(BrdU)
李氏放線桿菌人泛結(jié)合Bacillus licheniformis小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)
pET28a人蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)Bacillus licheniformis小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)
蘇云金芽孢桿菌人胱天蛋白激活的脫氧核糖核Bacillus licheniformis小鼠α1微球蛋白(α1-MG)
蘇云金芽胞桿菌莫氏變種人γ谷酰半胱合成Bacillus licheniformis小鼠α1微球蛋白(α1-MG)
紡錘狀鏈霉菌人泛激活Bacillus licheniformis小鼠單核趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)
微桿菌人胃蛋白Bacillus licheniformis小鼠單核趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)
鮑姆木層孔菌人己糖激Bacillus licheniformis小鼠過氧化物體增殖物激活受體α(PPAR-α)
鋅指蛋白903抗體蟬花1-10人角質(zhì)形成細胞
鋅指蛋白923抗體石耳貓腎細胞
鋅指蛋白297B抗體*土豆口蘑雞胚成纖維細胞
鋅指蛋白340抗體菊葉點霉人急性T淋巴細胞白血病細胞
IKK-2抑制劑(SC-514)根瘤 蒼術(shù)酮
毛栓 赤松
米曲霉 重樓皂苷E
富養(yǎng)羅爾斯通氏 橙花
平菇(紅平) 長梗秦艽酮
參子凸臍蠕孢 常山乙
紅曲霉 車葉草苷
銅綠假單胞 草酸
黃曲霉 橙黃決明-6-葡萄糖苷
金黃殼囊孢 次大風(fēng)子
地衣芽孢桿 次
喜鹽裸囊 茶黃-3,3'-雙沒食子酸
珞珈山鏈霉 催吐蘿芙木定
黑木耳 粗壯女貞苷N
梅林青霉 查斯馬寧