商品介紹:
ISA-2011B是PIP5Kα的抑制劑,具有抗癌前途,。 注:本品僅可用于科研實驗,,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號:1395347-24-6 純度:99.92% 分子量:423.85 儲存條件:-20℃,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用,。 |
以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,,500-1000g離心5min收集細胞,。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,,胰酶消化時間不宜過長或過短,,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,,將細胞輕輕吹打下來,,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞,。
3) 收集細胞后,,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細胞,,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細胞,,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測),。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置,。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),,PI為縱坐標(biāo),。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán),。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán),。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,5%,。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存,。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng),。
對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
小平菇(秀珍菇)轉(zhuǎn)抗體Anti-IRAK1 Antibody死亡因子4(MORF4)
蘇云金芽孢桿菌TATA框結(jié)合蛋白關(guān)聯(lián)因子12抗體Anti-IRAK1 Antibody死亡關(guān)聯(lián)蛋白激1(DAPK1)
鼠乳桿菌轉(zhuǎn)錄延伸因子B2抗體Anti-IRAK2 Antibody死骨片1(SQSTM1)
Starmerella sp.兔抗甲狀腺球蛋白Anti-IRAK1 Antibody斯鈣2(STC2)
枯草芽孢桿菌枯草亞種腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白3抗體Anti-IRAK2 Antibody絲織蛋白1(DBN1)
樟疫霉瞬時受體電位離子通道蛋白/M亞家族抗體Anti-IRAK3 Antibody絲束蛋白3(PLS3)
玉米大斑病菌腫瘤抑制轉(zhuǎn)移候選基因3抗體Anti-IRAK3 Antibody絲束蛋白1(PLS1)
發(fā)酵乳桿菌轉(zhuǎn)錄因子相互作用蛋白1抗體Anti-IRF1 Antibody絲切蛋白2(CFL2)
膠韌革菌(榆耳)腫瘤壞死因子配體超家族成員15抗體Anti-IRAK4 Antibody絲切蛋白1(CFL1)
彎孢菌轉(zhuǎn)移生長因子β5抗體Anti-IRF1 Antibody絲裂原激活蛋白激支架蛋白1(MAPKSP1)
谷棒桿菌磷化微管相關(guān)蛋白抗體Anti-IRF2 Antibody絲裂原激活蛋白激激激激5(MAP4K5)
玫瑰孢鏈霉菌磷化微管相關(guān)蛋白抗體Anti-IRF3 Antibody絲裂原激活蛋白激激激1(MAP3K1)
蠅卷霉磷化微管相關(guān)蛋白抗體Anti-IRF2 Antibody絲裂原激活蛋白激激6(MAP2K6)
*松乳菇磷化微管相關(guān)蛋白抗體Anti-IRF3 Antibody絲裂原激活蛋白激激1(MAP2K1)
ST0-2(大球蓋菇)磷化微管相關(guān)蛋白抗體Anti-IRF3 Antibody絲裂原激活蛋白激激活蛋白激3(MAPKAPK3)
易變鏈霉菌磷化酪激受體A抗體Anti-IRF4 Antibody絲裂原激活蛋白激激活蛋白激2(MAPKAPK2)
絲蛋白抑制劑B1抗體枯草芽孢桿菌黑色變種小鼠嗅鞘細胞
絲蛋白抑制劑B11抗體球毛殼(斜面)小鼠神經(jīng)星形膠質(zhì)細胞
絲蛋白抑制劑B3抗體腸沙門氏菌腸亞種嬰兒血清型小鼠腦動脈血管平滑肌細胞
跨膜蛋白SEMA4D抗體野油菜黃單胞菌小鼠腦膜成纖維細胞
PIP5Kα抑制劑(ISA-2011B)Boseongicola aestuarii 鋁,、鉍、鐵,、錳,、鉬、硅,、鉭,、鈦、鋅,、鋯/Al, Bi, Fe, Mn, Mo, Si, Ta, Ti骨成型蛋白4Elisa
皮爾瑞俄類芽孢桿 鋇,、鈹、鈰,、鈷,、銦、鋰,、鎂,、鉛、銠,、,、釔/Ba, Be, Ce, Co, In, Li, Mg,音猬因子aElisa
海南吉爾霉 砷、鎘,、鉻,、銅、銦,、鎂,、 鎳、磷,、鉛、硫,、碲/As, Cd, Cr, Cu, In, Mg, Ni,易位關(guān)聯(lián)Notch同源物1Elisa
稻黑孢霉 砷,、、鋇,、鎘,、鈷、鉻,、 鎳,、鉛、銻,、硒,、錫/As, B, Ba, Cd, Co, Cr, Ni,視黃脫氫2Elisa
新月彎孢 鋁,、砷、金,、鉍,、鎘、鐵,、銦,、鎳、鉛,、銻,、鋅/Al, As, Au, Bi, Cd, Fe, In,腫瘤壞死因子βElisa
蘇云金芽孢桿 鋁、砷,、鈣,、鈷、銅,、鐵,、 銦、鎂,、鎳,、鉛、鋅/Al, As, Ca, Co, Cu, Fe, In,軸蛋白axin2Elisa
小棒桿 砷,、鈷,、鉻、銅,、鐵,、銦、鎂,、錳,、鎳、鉛,、釩,、鋅/As, Co, Cr, Cu, Fe, In, Mg淋系增強子結(jié)合因子1Elisa
果生鏈核盤 鋁、砷,、鈣,、鉻、銅,、鐵,、 、鎂、鈉,、鎳,、鉛、鋅/Al, As, Ca, Cr, Cu, Fe, K金屬硫蛋白Elisa
解沒食子酸鏈球 鎵,、鍺,、銦、鉬,、銻,、鈧、錫,、鉭,、鈦、,、釩,、釔、鋯/Ga, Ge, In, Mo, Sb, Sc,前列腺Elisa
蠟狀芽孢桿 鋁,、鈣,、鈷、銅,、鐵,、、鎂,、錳,、鉬、鈉,、鎳,、鉛、釩/Al, Ca, Co, Cu, Fe, K, M類胰蛋白Elisa
嗜麥芽假單胞 鋁,、鈣,、鈷、鉻,、銅,、鐵、鎂,、錳、鈉,、鎳,、鉛、鈦、鋅/Al, Ca, Co, Cr, Cu, Fe,緊密連接蛋白1Elisa
*百脈根根瘤 鋁,、鈣,、鈷、鉻,、銅,、鐵、鎂,、錳,、鈉、鎳,、鉛,、鈦、鋅/Al, Ca, Co, Cr, Cu, Fe,白介12Elisa
阿納托利亞青霉 鋁/鈣/鎘/鉻/銅/鐵//鎂/錳/鈉/鎳/鉛/鋅/Al, Ca, Cd, Cr, Cu, Fe,白介15Elisa
栗疫病 砷,、鉍,、銅、鉻,、鐵,、鎂、錳,、鎳,、鉛、鈀,、銻,、硅、錫/As, Bi, Cu, Cr, Fe, Mg,γ氨基丁酸Elisa
淡紫擬青霉 銀,、砷,、鉻、銅,、鐵,、鎂、錳,、鎳,、鉛、鈀,、銻,、硒、碲/Ag, As, Cr, Cu, Fe, Mg,肝脂肪酸結(jié)合蛋白Elisa