以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
商品介紹:
ITE是一種芳香烴受體(AhR)激動劑,Ki值為3nM,ITE作用于OVCAR-3細胞增殖為,IC50值為0.2nM。 注:本品僅可用于科研實驗,,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號:448906-42-1 純度:98.0% 分子量:286.31 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用,。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度,。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水),。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞,。
對于貼壁細胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細胞,。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細胞,,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細胞,,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測),。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置,。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,,PI為縱坐標,。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,,細胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán)。
腸桿菌屬人類皰疹病8抗原Anti-FLT3 Antibody人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)
侵染鏈格孢缺氧誘導(dǎo)因子1α 多肽Anti-FLT4 Antibody人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)
弗雷曲霉組蛋白H3樣蛋白多肽Anti-FMN2 Antibody人P53(P53)
果生鏈核盤菌組蛋白H3樣蛋白(C端多肽)Anti-FLT3 Antibody人P53(P53)
葡萄座腔菌組蛋白H3樣蛋白(N端多肽)Anti-FNTB Antibody人周期D3(Cyclin-D3)
釀酒酵母艾滋病病-1/人類免疫缺陷病1型(抗原)Anti-FOLH1 Antibody人周期D3(Cyclin-D3)
哈茨木霉艾滋病病-1/人類免疫缺陷病1型(抗原)Anti-FN1 Antibody人周期D2(Cyclin-D2)ELISA
產(chǎn)克雷伯氏菌麻疹病紅血球凝集蛋白多肽Anti-FOLR1 Antibody人周期D2(Cyclin-D2)ELISA
玉米黑粉菌麻疹病紅血球凝集蛋白多肽Anti-FOS Antibody人周期D1(Cyclin-D1)
突孢毛殼荷爾蒙敏感脂肪(抗原)Anti-FOXB2 Antibody人周期D1(Cyclin-D1)
多粘類芽胞桿菌熱休克蛋白-27(抗原)Anti-FOXD3 Antibody人內(nèi)皮抑(ES)
釀酒酵母熱休克蛋白90α(抗原)Anti-FOXD4L1 Antibody人內(nèi)皮抑(ES)
枯草芽孢桿菌熱休克蛋白-90β (抗原)Anti-FOXC1 Antibody人鐵蛋白(FE)
阪崎腸桿菌腫瘤凋亡ASPP家族的另一個成員(抗原)Anti-FOXD4 Antibody人鐵蛋白(FE)
*芽胞桿菌(Bacillus atrophaeus)ATCC 9372,;(曾用名:枯草芽胞桿菌黑色變種)間粘附分子-1Anti-FOXD4L6 Antibody人微量轉(zhuǎn)鐵蛋白(MTF)
核盤菌白介1β(白介-1β)(多肽抗原)Anti-FOXE1 Antibody人微量轉(zhuǎn)鐵蛋白(MTF)
可溶性附著蛋白α-SNAP抗體豬霍亂沙門氏菌豬霍亂亞種綠色熒光蛋白標記人結(jié)直腸癌細胞
肝細胞生長因子激活抑制蛋白2抗體停乳鏈球菌小鼠肝癌細胞
分泌和跨膜蛋白1抗體綠膿假單胞菌(綠膿桿菌)人成骨肉瘤細胞
生成相關(guān)蛋白3抗體雅致放射毛霉=葡匐放射毛霉人卵巢顆粒細胞瘤
芳香烴受體(AhR)激動劑(ITE)茂原鏈霉 草酸亞鐵二水合物
球孢白僵 海
枯草芽孢桿 乙酸鈉
枯草芽孢桿 六氨和化鈷
嗜酸熱雙歧桿嗜酸熱亞種 5-羥甲基糠
北京紅簍 芴
金黃鱗蓋傘 菲啰一鈉鹽
F21(引)(金針菇) 三二鈉鹽
宇佐曲霉 沒食子酸月桂酯
金針菇 二硫代草酰氨
深黃小毛霉 1,3-二苯脲
毛柄(金針菇) 丁二酮肟二鈉鹽八水合物
枯草芽孢桿 N,N-二甲基甘鹽酸鹽
抗生鏈霉 L-(+)-二苯甲酰一水物
澳型核果褐腐病 D-(-)-二苯甲酰一水物