商品介紹:
Temsirolimus是一種mTOR抑制劑,IC50值為1.76μM,。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號(hào):162635-04-3 別名:Torisel;CCI-779 純度:98.88% 分子量:1030.29 儲(chǔ)存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用,。 |
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:mTOR抑制劑(Temsirolimus)
英文名稱:Temsirolimus
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|100mg
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核,、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究,;
③細(xì)胞骨架體系的研究,;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控,;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡),;
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一,、分離與培養(yǎng):
1,、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,最后將1mm3左右大小,;
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,,1200r/min 離心10min,,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5,、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min,;
4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,;
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h;
6,、用PBS沖洗3次,,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
操作規(guī)程
1,、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,,需根據(jù)細(xì)胞的大小,,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2,、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3,、將96孔板在37℃,,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4,、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液,。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,,在37℃孵育4小時(shí),,使MTT 還原為甲臜。
6,、吸出上清液,,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻,。
7,、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片),。
8,、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD,。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值,。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b,、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
芽孢桿菌屬免疫球蛋白超家族成員10抗體Human RIMKLB ELISA KitBeta Agonists(β-)免疫試劑盒
芽胞桿菌大腦和特異性免疫球蛋白超家族成員11抗體Human LRP11(Low-density lipoprotein receptor-related protein 11) ELISA Kit19-Nortestosterone(19-去甲睪)免疫試劑盒
蘇云金芽孢桿菌鲇澤亞種干擾α受體抗體Human RIMS4 ELISA Kit左右不對(duì)稱發(fā)育因子2(LEFTY2)
焦曲霉磷化干擾α受體抗體Human RIN3 ELISA Kit組織因子途徑抑制物-2(TFPI-2)
玫瑰皮黃鏈霉菌磷化胰島受體β抗體Human RINT1 ELISA Kit組織因子途徑抑制物(TFPI)
樟疫霉核因子κB抑制蛋白E抗體Human RING1 ELISA Kit組織因子(TF)
貝萊斯芽胞桿菌磷化整合β4抗體Human ribosomal protein L4 ELISA Kit組織型纖溶原激活劑(t-PA)
大腸埃希氏菌磷化整合β4抗體Human RIC8A ELISA Kit組織相容性復(fù)合體Ⅰ類相關(guān)基因A(MICA)
嗜腳動(dòng)物咸海鮮球菌IQCD蛋白抗體Human DDT(D-Dopachrome Tautomerase) ELISA Kit組織相容性2-K1-K區(qū)(H2-K1)
硝鹽還原嗜鹽堿桿菌IQCC蛋白抗體Human RGS5 ELISA Kit組織多肽特異性抗原(TPS)
棲土曲霉IQCA1蛋白抗體Human RGS7(Regulator of G-protein signaling 7) ELISA Kit組織多肽抗原(TPA)
矩圓黑盤孢集成復(fù)雜蛋白亞單位3抗體Human RGS9 ELISA Kit組織蛋白去乙酰化(HD)
孤島海桿狀菌干擾alpha 14蛋白抗體Human RGSL1 ELISA Kit組織蛋白抗體(Cath Ab)
嗜松籃狀菌白介6抗體Human RHBDD1 ELISA Kit組織蛋白S(CTSS)
環(huán)狀芽胞桿菌白介-10抗體Human RHBDL2 ELISA Kit組織蛋白L1(CTSL1/CTSL)
植物乳桿菌植物亞種白介6抗體Human RHCG ELISA Kit組織蛋白K(cath-K)
AS2.590資源名稱: 平滑假絲酵母 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)蘆薈苷
赭鮭色正青霉Eupenicillium│ochrosalmoneum 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)苦玄參苷IB
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(GC)苦玄參苷IA
mTOR抑制劑(Temsirolimus)短小芽胞桿 4-二甲基氨基熱休克蛋白27Elisa
Lonsdalea quercina subsp. quercina N-乙酰-3,,5-二-L-酪氨酸熱休克蛋白-70Elisa
地衣芽孢桿 3,5-二甲氧基苯熱休克蛋白90Elisa
條紋炭角 磺吡乳清蛋白Elisa
枯草芽孢桿 2,5-二甲氧基苯乳酸Elisa
發(fā)酵乳桿 異脲酸三烯酯乳酸脫氫Elisa
圓芝6號(hào) 2-甲基氨-5-二苯甲酮乳鐵蛋白Elisa
施氏假單胞 碳酸二苯酯狀腺原氨酸Elisa
香氣紅冬孢鎖擲孢酵母 二芐酮生長Elisa
大腸埃希氏 乙酯視黃結(jié)合蛋白Elisa
馬腺疫鏈球獸疫亞種 烯硫視黃結(jié)合蛋白4Elisa
杉葉散斑殼 甲基烯酸環(huán)己酯瘦Elisa
弓形蟲(GJS-2株) 苯基化鎂酸性磷酸Elisa
根瘤 環(huán)己羧甲基賴氨酸Elisa
三葉草根瘤 馬來酸二烯酯鎖鏈Elisa