產(chǎn)品屬性:
中文名稱(chēng):廣譜Caspase抑制劑(Z-VAD-FMK)(20mM)
英文名稱(chēng):General Caspase Inhibitor Z-VAD-FMK (20 mM
產(chǎn)品規(guī)格:25μl
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹:
Z-VAD-FMK是一種細(xì)胞滲透性,,不可逆的泛caspase抑制劑,,能夠抑制caspase家族蛋白酶活性和阻斷凋亡發(fā)生,。Jurkat細(xì)胞中Z-VAD-FMK抑制Fas誘導(dǎo)的凋亡,胸腺細(xì)胞和肝細(xì)胞內(nèi)抑制各種刺激因子激發(fā)的凋亡活動(dòng),。高濃度Z-VAD-FMK (> 100μM)改善TNFα誘導(dǎo)的嗜中性粒細(xì)胞凋亡,,相反低濃度((1-30 μM)*阻止TNFα激活的凋亡發(fā)生。Z-VAD-FMK的促凋亡活性具有化合物特異性和ROS非依賴(lài)性的特點(diǎn),。Z-VAD-FMK 也具有體內(nèi)活性,。 不同于傳統(tǒng)的Z-VAD-FMK,提供的多肽在天冬氨酸的P1位點(diǎn)進(jìn)行了O-甲基化的修飾,,使其穩(wěn)定性和細(xì)胞滲透性都得以提高,。一旦進(jìn)入細(xì)胞,內(nèi)源性酯酶水解甲基基團(tuán)從而形成具生物活性的肽形式,。 本品為溶于DMSO的儲(chǔ)存液,,濃度為20mM。 英文別名:Benzyloxycarbonyl-Val-Ala-Asp(OMe)-fluoromethylketone; Z-VAD(OMe)-FMK,Z-Val-Ala-Asp(OMe)-FMK; CAS:187389-52-2 分子式:C22H30FN3O7 分子量:467.49 外觀:液體 純度:>94% 儲(chǔ)存條件:-20℃,,有效期6個(gè)月 |
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核,、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究,;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控,;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化,;
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一,、分離與培養(yǎng):
1,、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化,;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,,1200r/min 離心10min,,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5,、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min,;
4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜,;
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h;
6,、用PBS沖洗3次,,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
凝血因子ⅩⅢ(F13)英文名稱(chēng):F13 ELISA Kit囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)因子抗體包裝250mg
凝血因子Ⅹ(F10)英文名稱(chēng):F10 ELISA Kit酪蛋白激2相互作用蛋白1抗體包裝1g
凝血因子Ⅸ(F9)英文名稱(chēng):F9 ELISA KitCD40L抗體包裝25g
凝血因子Ⅷ(F8)英文名稱(chēng):F8 ELISA Kitα-s1酪蛋白抗體包裝5g
凝血因子Ⅶ(F7)英文名稱(chēng):F7 ELISA KitCIDEB抗體包裝5ml
凝血因子Ⅴ(F5)英文名稱(chēng):F5 ELISA Kit高密度脂蛋白受體/清道夫受體抗體包裝25g
凝血因子Ⅱ(F2)英文名稱(chēng):F2 ELISA Kit信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白亞基7A抗體包裝5g
凝血/抗凝血復(fù)合體(TAT)英文名稱(chēng):TAT ELISA Kit凋亡抑制因子抗體包裝1g
凝溶膠蛋白(GS)英文名稱(chēng):GS ELISA KitD型產(chǎn)氣莢膜梭菌抗體包裝5g
凝集樣氧化低密度脂蛋白受體1(LOX1)英文名稱(chēng):LOX1 ELISA Kit降鈣抗體包裝1g
鎳紋蛋白(METRN)英文名稱(chēng):METRN ELISA Kit20號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框14抗體包裝250mg
尿調(diào)蛋白(UMOD)英文名稱(chēng):UMOD ELISA Kit結(jié)締組織生長(zhǎng)因子抗體包裝25g
尿皮質(zhì)3(UCN3)英文名稱(chēng):UCN3 ELISA Kit性T抗原-4抗體包裝1g
尿皮質(zhì)2(UCN2)英文名稱(chēng):UCN2 ELISA Kit降鈣受體抗體包裝5g
尿皮質(zhì)1(UCN1)英文名稱(chēng):UCN1 ELISA Kit1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框38抗體包裝100mg
副球菌Paracoccus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:純度>97%腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ試劑盒植;Phytic acid
泊庫(kù)島食烷菌Alcanivorax│borkumensis 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品腫瘤壞死因子超家族15試劑盒q;fraxinellone
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:UV≥98%,,標(biāo)準(zhǔn)品腫瘤壞死因子γ試劑盒芝麻酚;Sesamol
廣譜Caspase抑制劑(Z-VAD-FMK)(20mM)枯草芽孢桿 4,4'-雙(4-氨基苯氧基)二苯砜胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3Elisa
黑曲霉3.3928 氧化鈷(III)胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4Elisa
米根霉 3-氯苯乙胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-6Elisa
馬杜拉放線(xiàn) 2-甲氧基苯氧基乙酸乙酯胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-7Elisa
總狀共頭霉 苯甲氧羰基-DL-色氨酸胰島樣因子5Elisa
釀酒酵母 烯草酮胰島原Elisa
多根硬皮馬勃 溴甲氧胰淀Elisa
釀酒酵母 (R)-N-芴甲氧羰基-3-氨基-3-苯基-1-胰高血糖Elisa
大葉胡枝子腐朽病 2-溴苯并噻唑-6-羧酸乙酯胰高血糖樣肽1Elisa
銅綠假單胞(綠膿桿) 3-氧代環(huán)丁基氨酸芐酯胰高血糖樣肽1.7-36Elisa
大豆慢生根瘤 4-氨甲基四氫吡喃胰高血糖樣肽2Elisa
豬瘟病間接ELISA抗體Elisa 5-溴-1,3-二氟-2-芐氧基苯胰羧肽B2Elisa
多粘類(lèi)芽胞桿 2-氯-3-溴-5-胰腺癌標(biāo)志物-CA242Elisa
嗜芽孢桿 5-氨基-2-溴-3-氯吡啶胰腺衍生因子Elisa
白色茶樹(shù)菇 2-羥基異丁酰胰脂肪Elisa
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定),。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3,、將96孔板在37℃,,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4,、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液,。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,,在37℃孵育4小時(shí),,使MTT 還原為甲臜。
6,、吸出上清液,,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻,。
7,、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片),。
8,、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD,。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值,。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b,、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)