Src激酶家族抑制劑（PD173955）公司正在出售的產(chǎn)品：TLR1/FITC 熒光標(biāo)記Toll樣受體1抗體IgG
TLR2/CD282 /FITC 熒光標(biāo)記Toll樣受體2抗體IgG
TLR3 /FITC 熒光標(biāo)記Toll樣受體3抗體IgG
TLR4/FITC 熒光標(biāo)記Toll樣受體4抗體IgG
TLR5/CD285 /FITC 熒光標(biāo)記Toll樣受體5抗體IgG
TLR6/CD286

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

商品介紹：

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37℃,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存,。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍,，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

對于懸浮細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM,，常溫條件下離心5分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。

2) 對于懸浮細(xì)胞,，500-1000g離心5min收集細(xì)胞,。

對于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,，加入細(xì)胞培養(yǎng)液,，將細(xì)胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),，500-1000g離心5min收集細(xì)胞,。

3) 收集細(xì)胞后,，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞,，共洗滌兩次,。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞,，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml,。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,，輕輕混勻,，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測

1) 流式細(xì)胞儀檢測：

染色孵育后,，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測（1小時內(nèi)檢測）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot）,，F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo),。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測：

染色孵育后涂片,，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán),。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色,，膜上有綠色光環(huán),。
蘑菇Rhodopseudomonas palustris大鼠膽囊收縮/腸促胰肽(CCK)

桿菌Rhodobacter sphaeroides大鼠腦腸肽(BGP/Gehrelin)

光硬皮馬勃Rhodobacter sphaeroides大鼠腦腸肽(BGP/Gehrelin)

盤長孢狀盤孢Bifidobacterium longum subsp. sius大鼠6前列腺(6-K-PG)

釀酒酵母Bifidobacterium pseudolongum subsp. pseudolongum大鼠6前列腺(6-K-PG)

臭椿尾孢菌Bifidobacterium longum subsp. longum大鼠載脂蛋白A1(apo-A1)

HalomonasBifidobacterium magnum大鼠載脂蛋白A1(apo-A1)

球孢白僵菌Bifidobacterium dentium大鼠載脂蛋白B100(apo-B100)

浩爾谷農(nóng)球菌Bifidobacterium adolescentis大鼠載脂蛋白B100(apo-B100)

棲熱菌屬Rhodovulum sulfidophilum大鼠25羥基維生D3(25(OH)D3/25 HVD3)

假根蘑菇Rhodopseudomonas sp.大鼠25羥基維生D3(25(OH)D3/25 HVD3)

黑曲霉Rhodocista pekingensis大鼠Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)

鮑魚側(cè)耳Rhodobium marinum大鼠Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)

謝瓦曲霉Blastochloris viridis大鼠Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)

蘇云金芽孢桿菌Bifidobacterium catenulatum大鼠Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)

中間氣單胞菌Haloferax denitrificans大鼠維生C(VC)

核糖核苷還原亞基R2抗體平菇禽腺病毒(3型)

Rho相關(guān)蛋白激2抗體銀絲草菇傳染性喉氣管炎病毒

G蛋白信號調(diào)節(jié)因子14抗體佛羅里達(dá)側(cè)耳家蠶微孢子蟲CQ1株

核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB受體抗體核因子kB受體活化因子粉褶側(cè)耳巨型艾耳球蟲
Src激酶家族抑制劑（PD173955）解脂耶氏酵母 干酪

解淀粉芽孢桿 苯脲

香菇 甲殼

寡養(yǎng)單胞 葫蘆B

釀酒酵母 4'-去甲氧基表鬼臼

絲蓋小苞腳菇 鴨腳樹葉堿

多主葡萄殼 表木栓

牛雙歧桿 路路通酸

中慢生華癸根瘤 胡麻屬苷

產(chǎn)堿假單胞 次野鳶尾黃

嗜熱球形桿 石吊蘭甲

澳型核果褐腐病 白頭翁皂苷B4

植物乳桿 二氫歐山芹當(dāng)歸酸酯

門多薩假單胞 紫菀酮

康氏木霉 白鮮堿