商品介紹:
Importazole是核轉(zhuǎn)運受體importin-β的小分子抑制劑,。 注:本品僅可用于科研實驗,,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號:662163-81-7 純度:99.20% 分子量:318.42 儲存條件:-20℃,,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用,。 |
以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水),。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞,。
對于貼壁細胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細胞,共洗滌兩次,。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml,。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測),。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置,。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),,F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),,PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,,活細胞僅有很低強度的背景熒光,,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,,細胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%;二氧化碳,,5%,。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲存,。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度,。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
殺鮭氣單胞菌PE-CY5標(biāo)記的兔抗人分泌型IgAAnti-SERPINH1 Antibody(PB0300)核因子相關(guān)κB結(jié)合蛋白(NFRkB)
麥根腐平臍蠕孢Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗人分泌型IgAAnti-SETD1A Antibody核因子κB抑制因子β(IκBβ)
紫黑杜搟氏菌PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗人分泌型IgAAnti-SETDB2 Antibody核因子κB抑制因子α(IκBα)
產(chǎn)二鏈霉菌PE-Cy7標(biāo)記的兔抗人分泌型IgAAnti-SEZ6L Antibody核因子κB受體激活因子配基(RANκL)
釀酒酵母Cy3標(biāo)記的兔抗人分泌型IgAAnti-SF1 Antibody核因子κB受體激活因子(RANκ)
橙灰緊旋鏈霉菌辣根過氧化物標(biāo)記的兔抗人IgGAnti-SERPINI1 Antibody核因子κB激抑制因子相互作用蛋白(IκBIP)
鴨疫里氏桿菌PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗人IgMAnti-SF1 Antibody核因子κB2(NFκB2)
紫色紅曲PE-Cy7標(biāo)記的兔抗人IgMAnti-SF3B4 Antibody核因子κB(NFκB)
糞產(chǎn)堿菌辣根過氧化物標(biāo)記的鼠抗人IgG單克抗體Anti-SFN Antibody核氧化還原蛋白(NXN)
白地霉辣根過氧化物標(biāo)記的羊抗人IgGAnti-SFN Antibody核小體裝配蛋白1樣1(NAP1L1)
殼蕉孢菌PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗馬IgMAnti-SFRP1 Antibody核纖層蛋白B2(LMNB2)
光帽鱗傘(滑菇)PE-Cy7標(biāo)記的兔抗馬IgMAnti-SFRP2 Antibody核纖層蛋白B1(LMNB1)
橙鱗傘PE-Cy3標(biāo)記的兔抗馬IgMAnti-SFRP4 Antibody核纖層蛋白A/C(LMNA)
干草鞘單胞菌PE-CY5標(biāo)記的兔抗馬IgMAnti-SFRP2 Antibody核糖體結(jié)合糖蛋白Ⅱ(RPN2)
TardiphagaPE-Cy3標(biāo)記的兔抗馬IgGAnti-SFRP4 Antibody核糖體結(jié)合糖蛋白Ⅰ(RPN1)
Thraustochytrium sp. Cy5標(biāo)記的羊抗人IgMAnti-SFTPA1 Antibody核糖體蛋白S6激β1(RPS6Kβ1)
神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白1抗體氣味沙雷氏菌大鼠腎小管平滑肌細胞提取物
神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白2抗體浸麻類芽孢桿菌大鼠腎動脈內(nèi)皮細胞提取物
神經(jīng)外營養(yǎng)蛋白2抗體粘金黃桿菌大鼠膀胱成纖維細胞提取物
腦特異性蛋白BPX抗體Bacillussolimangrovi大鼠前列腺上皮細胞提取物
核轉(zhuǎn)運受體importin-β抑制劑(Importazole)紫色直絲鏈霉 五脂酮C
枯草芽孢桿 聚乙二2000
Parasphingopyxis lamellibrachiae 五脂酮A
釀酒酵母 南五味子木脂L
銳齒櫟蛙眼 聚乙二1500
乙型副傷寒沙門 肥牛木
暗黑微綠鏈霉 聚乙二1000
食氫袋狀* 戈米辛F
寬圓羊肚 戈米辛S
產(chǎn)氣莢膜梭 A型 聚乙二800
蘇云金芽孢桿達可他亞種 五味子酯
異色擬盤多毛孢 聚乙二600
泡盛曲霉 龍膽黃堿
產(chǎn)堿假單胞 印度榅桲
玉蜀黍平臍蠕孢 聚乙二400