公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核,、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究,;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控,;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化,;
⑧細(xì)胞工程.
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:ALK激酶抑制劑(ALK-IN-1)
英文名稱:ALK-IN-1
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
發(fā)貨周期:1~3天
商品介紹:
ALK-IN-1是ALK激酶高效選擇性抑制劑,,出自US20140066406A1。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號(hào):1197958-12-5 純度:99.80% 分子量:529.01 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用,。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1,、無(wú)菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,最后將1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化,;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,,1200r/min 離心10min,,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5,、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二,、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h,;
6、用PBS沖洗3次,,每次10min,,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1,、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,,需根據(jù)細(xì)胞的大小,,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定),。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物,。
3,、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間,。
4,、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5,、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),,使MTT 還原為甲臜,。
6、吸出上清液,,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,,用平板搖床搖勻。
7,、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8,、結(jié)果分析
a,、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,,無(wú)細(xì)胞),,各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b,、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
谷棒桿菌人著絲粒蛋白BBacillus thuringiensis subsp. tohokuensis小鼠銅藍(lán)蛋白(CP/CER)
擬莖點(diǎn)霉人巨噬激蛋白Bacillus thuringiensis subsp. tolworthi小鼠p53(p53)
釀酒酵母人雷帕霉靶蛋白Bacillus thuringiensis subsp. yunnanensis小鼠p53(p53)
蠟樣芽胞桿菌 (蠟狀芽胞桿菌)人核基質(zhì)蛋白22Bacillus vallismortis小鼠環(huán)磷鳥苷(cGMP)
溫特曲霉煙色變種人軟骨寡聚蛋白Bacillus thuringiensis subsp. wenquanensis小鼠環(huán)磷鳥苷(cGMP)
指甲絨隱球酵母人多藥耐藥相關(guān)蛋白Bacillus vedderi小鼠一氧化氮合成(NOS)
檸條根瘤菌人高速泳動(dòng)蛋白17Escherichia coli小鼠一氧化氮合成(NOS)
假白布勒酵母人空泡相關(guān)蛋白AEscherichia blattae小鼠誘導(dǎo)型一氧化氮合成(iNOS)
枯草芽孢桿菌人玻連蛋白/體外粘連蛋白Escherichia coli小鼠誘導(dǎo)型一氧化氮合成(iNOS)
粗毛栓菌人波形蛋白Escherichia coli小鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成(eNOS)
枯草芽胞桿菌人表面活性蛋白DEscherichia coli小鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成(eNOS)
強(qiáng)壯類芽孢桿菌人阿伯半乳糖蛋白Escherichia coli小鼠組(HIS)
豬瘟病人β乳球蛋白Escherichia coli小鼠組(HIS)
熒光假單胞菌人β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白Escherichia coli小鼠脂蛋白相關(guān)磷脂A2(Lp-PL-A2)
大葉黃楊炭疽病人淀粉樣前體蛋白Escherichia coli小鼠脂蛋白相關(guān)磷脂A2(Lp-PL-A2)
炭疽桿菌 (可定)人β2糖蛋白Escherichia coli小鼠熱休克蛋白90(HSP-90)
神經(jīng)細(xì)胞正五聚體1抗體楊盤二孢豚鼠心肌細(xì)胞
NADH脫氫黃蛋白2抗體松口蘑小鼠單核巨噬細(xì)胞
NADH氧化還原輔1抗體球蓋菇屬人腎曲小管細(xì)胞
嗜中性粒細(xì)胞胞漿因子1抗體黃粘蓋牛肝菌人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞
ALK激酶抑制劑(ALK-IN-1)褪色沙雷氏(粘質(zhì)沙雷氏) 3-[N,,N-雙(2-)]氨基-2-羥基磺酸
大腸埃希 N-三(羥甲基)甲-2-羥基磺酸鈉鹽
蘇云金芽孢桿印第安那亞種 土荊皮甲酸
平臍蠕孢 N-三(羥甲基)甲-2-羥基磺酸
黑曲霉 原花青B1
異常畢赤酵母 N-三(羥甲基)甲基-3-氨基磺酸鈉鹽
靈芝 里奧林
糞產(chǎn)堿桿 N-三(羥甲基)甲基-3-氨基磺酸
血紅絨牛肝 羅漢果苷VI
胡椒枯萎病 N-三(羥甲基)甲基-2-氨基乙磺酸鈉鹽
枯草芽孢桿 N-三(羥甲基)甲基-2-氨基乙磺酸
暗孢小克銀漢霉 3-(N-啉)-2-羥基磺酸鈉鹽
硫磺(硫色多孔) 3-(N-啉)-2-羥基磺酸
大腸埃希氏 羅漢果苷IV
豬丹絲 3-(N-啉)磺酸鈉鹽