詳細介紹
商品介紹:
AG18(RG-50810;Tyrphostin A23)是EGFR的抑制劑,,IC50值為35μM,。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號:118409-57-7 別名:RG-50810;Tyrphostin A23 純度:98.04% 分子量:186.17 儲存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用,。 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
AG 18 | 1mL(10mM)|10mg|50mg | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水),。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞,。
對于貼壁細胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,,加入細胞培養(yǎng)液,,將細胞輕輕吹打下來,,轉移到離心管內,500-1000g離心5min收集細胞,。
3) 收集細胞后,,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,,共洗滌兩次,。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,,使細胞濃度達到1×106 cell/ml,。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測),。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,,正常細胞組可作為熒光補償調節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置,。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),,F(xiàn)ITC為橫坐標,,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,,活細胞僅有很低強度的背景熒光,,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光,。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán),。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán),。
公司產品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%,;優(yōu)質胎牛血清,,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,5%,。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存,。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度,。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
華根霉信號通路Wnt1抗原Anti-ERAP1 Antibody人H-ras
海岸微小桿菌包含氧化還原的WW域抗原Anti-EPS8L3 Antibody人H-ras
靈芝草X-連鎖凋亡蛋白/性連鎖凋亡抑制蛋白抗原Anti-ERAS Antibody人c-sis
菱形伊薩酵母XIAP相關因子1凋亡抑制蛋白抗原Anti-ERAS Antibody人c-sis
大腸埃希氏桿菌X射線修復交叉互補蛋白/堿基切除修復基因抗原Anti-ERBB3 Antibody人c-jun
豇豆慢生根瘤菌胞質緊密粘連蛋白1抗原Anti-ERBB3 Antibody人c-jun
布魯氏菌ARC(多肽抗原)Anti-ERBB3 Antibody人c-fos
爪哇根霉血管緊張Ⅱ受體(抗原)Anti-ERCC5 Antibody人c-fos
白黃側耳蛋白激C(多肽抗原)Anti-ERCC4 Antibody人c-myc癌基因產物(c-myc)
灰肉色鏈霉菌腎上腺能受體β1(抗原)Anti-ERCC1 Antibody人c-myc癌基因產物(c-myc)
球孢白僵菌膜粘連蛋白-5(抗原)Anti-ERF Antibody人Smad1
暗灰鏈霉菌水通道蛋白-4(抗原)Anti-ERGIC3 Antibody人Smad1
唐菖蒲伯克霍爾德氏菌B7-H4(抗原)Anti-ERI1 Antibody人Smad7
糞產堿桿菌*BADH2抗原Anti-ERI1 Antibody人Smad7
白蘭鏈霉菌骨鈣(抗原)Anti-ERLIN1 Antibody人腫瘤相關抗原(TAA)
鬼傘屬鈣激活通道蛋白Anti-ES8L1 Antibody人腫瘤相關抗原(TAA)
發(fā)育多能性相關蛋白3抗體菊糖芽孢乳桿菌人腎透明細胞癌
血影蛋白A鏈紅細胞型抗體類紅紅細菌小鼠漿細胞瘤
相關抗原6抗體牙齦卟啉單胞菌人急性原粒細胞白血病細胞
亞硫鹽氧化抗體匣狀粘球菌人Burkitt's淋巴瘤細胞
EGFR抑制劑(AG 18)乳酸乳球乳脂亞種 十九酸甲酯
嗜堿擬諾氏 3-甲
粉狀畢赤酵母 焦磷酸四芐酯
深綠木霉 異香蘭酸
類干酪乳桿 乙酸甲脒
冬青炭疽病 對羥基苯酮
匍枝根霉原變種 咖啡酸
多主葡萄殼 4-甲氧基
黑曲霉 乙酸酯
分散泛(可訂) 3,5-二氟吡啶
三鏈霉 (1S,2S)-1,2-二苯基乙二
灰綠曲霉 2-磺基酐
玉蜀黍尾孢* 1-丁基-3-甲基六氟磷酸鹽咪唑啉嗡
大腸埃希 9,10-菲二酮
半園田頭菇 對羥基苯乙