以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
HSP90抑制劑(BIIB021) | BIIB021 | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,5%,。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
商品介紹:
BIIB021是一種可全合成的HSP90抑制劑,,Ki值和EC50值分別為1.7nM和38nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號:848695-25-0 別名:CNF2024 純度:99.62% 分子量:318.76 儲存條件:-20℃,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用,。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,,500-1000g離心5min收集細(xì)胞,。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,,胰酶消化時間不宜過長或過短,,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,,將細(xì)胞輕輕吹打下來,,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞,。
3) 收集細(xì)胞后,,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次,。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml,。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測),。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置,。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),,F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo),。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán),。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán),。
芽胞桿菌熒光APC標(biāo)記馬IgMAnti-IL1B Antibody人β2糖蛋白1抗體IgA(β2-GP1 Ab IgA)
都柏林沙門氏菌熒光APC標(biāo)記人IgGAnti-IL1F10 Antibody人β2糖蛋白1抗體IgA(β2-GP1 Ab IgA)
芽孢桿菌熒光APC標(biāo)記人IgMAnti-IL1RAPL2 Antibody人β2糖蛋白1抗體IgM(β2-GP1 Ab IgM)
草菇熒光APC標(biāo)記人IgAAnti-IL1R2 Antibody人β2糖蛋白1抗體IgM(β2-GP1 Ab IgM)
天藍(lán)褐鏈霉菌熒光APC標(biāo)記猴IgGAnti-IL20 Antibody人β2糖蛋白1抗體IgG(β2-GP1 Ab IgG)
釀酒酵母熒光APC標(biāo)記猴IgMAnti-IL20RB Antibody人β2糖蛋白1抗體IgG(β2-GP1 Ab IgG)
Vibrio熒光APC標(biāo)記豬IgGAnti-IL22 Antibody人抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)
假單孢菌熒光APC標(biāo)記大鼠IgMAnti-IL24 Antibody人抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)
長根奧德菇(長根菇)熒光APC標(biāo)記豬胰島蛋白Anti-IL32 Antibody人抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)
枯草芽孢桿菌熒光APC標(biāo)記血藍(lán)蛋白Anti-IL26 Antibody人抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)
蕈狀芽孢桿菌熒光APC標(biāo)記人血白蛋白Anti-IL31RA Antibody人抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)
柯氏黑蛋巢熒光APC標(biāo)記胰糜蛋白Anti-IL36A Antibody人抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)
長孢被孢霉熒光Cy3標(biāo)記鏈霉親和Anti-IL27 Antibody人抗高爾基體抗體(AGAA)
石南棒桿菌熒光Cy3標(biāo)記親合Anti-IL36B Antibody人抗高爾基體抗體(AGAA)
冷海水黃桿菌Cy3標(biāo)記蛋白AAnti-IL36RN Antibody人沙眼衣原體(CT)
圈卷產(chǎn)色鏈霉菌熒光Cy3標(biāo)記兔IgG(流式同型對照)Anti-IL5RA Antibody人沙眼衣原體(CT)
減數(shù)分裂重組蛋白家族REC8抗體蝕脈鐮孢霉小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(VAP33-GFP融合蛋白穩(wěn)定過表達(dá))
指狀蛋白RET抗體構(gòu)巢曲霉小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記)
磷化蛋白體PSMβ7抗體黃柄曲霉NPC2融合瘤細(xì)胞
ras癌基因家族RAB8B抗體棒曲霉人甲狀腺癌細(xì)胞(未分化)
HSP90抑制劑(BIIB021)炭疽皮張抗原(液體) 山芝烯三
綠色木霉 千層塔烯二,鋸齒石松烯二,,山芝烯二
球孢白僵 蛇根亭堿
博岑土地桿 Sequirin C
土生星耳酵母 Sepinol
皮特不動桿 Seneciphylline N-oxide
禾谷鐮孢 二氧馬錢苷甲酯
鏈格孢 黃芩酸
空腸彎曲桿 乙酸東莨菪酯
繩生毛殼 綿棗兒
微白類諾氏 檜脂,,灑維寧
大腸埃希氏 薩杷晉堿
南假單胞 垂盆鈔草甙(治肝炎藥),垂盆草甙
大腸埃希氏○抗原微量凝集定型血清診斷液 ○54 蘇木查耳酮
雙孢蘑菇(白蘑菇,、洋蘑菇) 茜草喬木 B