商品介紹:
STF-31是一種葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)1抑制劑(GLUT1,IC50=1μM),。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗,,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號:724741-75-7 純度:98.03% 分子量:423.53 儲存條件:-20℃,,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用,。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水),。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞,。
對于貼壁細(xì)胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,,胰酶消化時間不宜過長或過短,,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,,將細(xì)胞輕輕吹打下來,,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞,。
3) 收集細(xì)胞后,,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次,。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml,。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測),。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置,。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),,F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),,PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán),。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán),。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲存,。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
米曲霉大鼠白介18Anti-TRIM25 Antibody人軟骨糖蛋白39(HC gp-39)
解葡聚糖類芽胞桿菌人腎上腺髓質(zhì)Anti-TRIM38 Antibody人不透光相關(guān)蛋白(OPAs)
土曲霉小鼠白介10Anti-TRIM68 Antibody人不透光相關(guān)蛋白(OPAs)
納地青霉人免疫反應(yīng)性生長激Anti-TRIP13 Antibody人鞭毛蛋白(flagellin)
凍干粉 產(chǎn)氣莢膜梭菌計數(shù)大鼠胰島樣生長因子2Anti-TRMT11 Antibody人鞭毛蛋白(flagellin)
葡萄座腔菌屬大鼠胰島樣生長因子1Anti-TROVE2 Antibody人多聚血清蛋白(PHSA)
釀酒酵母人抗尿激/血管加壓/精加壓Anti-TSN Antibody人多聚血清蛋白(PHSA)
粉狀畢赤酵母人甘肽/甘Anti-TRPS1 Antibody人胞漿免疫球蛋白(CIg)
Bacillus siamensis 大鼠γ干擾Anti-TSHZ1 Antibody人胞漿免疫球蛋白(CIg)
pBluescript II大鼠間粘附分子1Anti-TSEN54 Antibody人纖維介蛋白(fgl2)
產(chǎn)黃青霉人促胰液/分泌受體Anti-TSC22D1 Antibody人纖維介蛋白(fgl2)
澳型核果褐腐病菌人雌激受體Anti-TSHZ2 Antibody人泛蛋白(Ub)
大腸埃希菌大鼠粒巨噬集落激因子Anti-TSPAN7 Antibody人泛蛋白(Ub)
熱帶假絲酵母人超敏生長激Anti-TSSK4 Antibody人類粘蛋白(ORM)
黃隱球酵母大鼠膠質(zhì)系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子Anti-TSSK4 Antibody人類粘蛋白(ORM)
哈茨木霉大鼠趨化因子Anti-TSTA3 Antibody人彈性蛋白(ELN)
泛蛋白連接2E2抗體固氮菌抗人絨毛膜促性腺激α7
泛蛋白連接D4抗體松針座盤孢菌抗抗人垂體泌乳7
泛蛋白連接D3抗體蜜環(huán)菌A9抗呼吸道合胞病毒單克抗體7株
泛蛋白連接D1抗體肉色栓菌1#-1抗CEA小鼠雜交瘤
葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)1抑制劑(STF-31)乳酸乳球乳亞種 蒲公英甾
孢吸水鏈霉北京變種 L-天冬鎂
黑木耳 派立辛
蠟狀芽孢桿 L-天門冬
紅酵母屬 L-天門冬鈉鹽
大腸埃希 尼泊金異酯
谷棒桿 L-天冬
長枝木霉 尼泊金異丁酯
醬油曲霉 L-鳥乙酯鹽酸鹽
微小鏈霉 牛膝甾酮
大腸埃希氏 DL-鳥鹽酸鹽
鴨疫里氏桿
皺褶假絲酵母 D-鳥鹽酸鹽
大腸埃希 鳥
根瘤 L-鳥鹽酸鹽