以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%;二氧化碳,,5%,。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲存,。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng),。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Cenicriviroc是一種可CCR2/CCR5雙重抑制劑,,具有顯著的抗炎,、抗感染的功效。 注:本品僅可用于科研實驗,,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號:497223-25-3 別名:TAK-652;TBR-652 純度:97.09% 分子量:696.94 儲存條件:-20℃,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用,。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,,500-1000g離心5min收集細胞,。
對于貼壁細胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細胞,共洗滌兩次,。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml,。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),,F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標,。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光,。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,,細胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán),。
異去蟛蜞菊內(nèi)酯英文名稱: DL-Alanine肝生長因子激活蛋白抗體包裝5g
異去氫鉤藤堿(標準品)英文名稱: DL-Tyrosine肝癌衍生生長因子抗體(高遷移率族蛋白1樣蛋白2抗體)包裝100g
異珊瑚菜英文名稱: DL-Methionine磷化組蛋白H3抗體包裝25g
異鼠李(標準品)英文名稱: DL-Aspartic acid核糖基轉(zhuǎn)移1抗體包裝5g
異鼠李-3-O-槐二糖-7-O-鼠李糖苷(標準品)英文名稱: DL-Glutamine乙酰化組蛋白H3抗體包裝1g
異鼠李-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷(標準品)英文名稱: DL-Proline乙?;土谆M蛋白H3抗體包裝5g
異鼠李-3-O-葡萄糖苷(標準品)英文名稱: DL-Alanine methyl ester hydrochloride組蛋白H2A抗體包裝1g
異鼠李-3-O-新橙皮苷(標準品)英文名稱: H-Glu(OEt)-OH乙?;M蛋白H2A抗體包裝5g
異飛薊賓英文名稱: N-Acetyl-DL-leucine 乙酰化組蛋白H2B抗體包裝1g
異土木香內(nèi)酯(標準品)英文名稱: N6-Cbz-L-Lysine乙?;M蛋白H2B抗體包裝1mg
異夏佛塔苷(標準品)英文名稱: Esmolol HCl磷化組蛋白H2AX抗體包裝10g
異型南五味子?。藴势罚┯⑽拿Q: Esmolol HCl磷化熱休克蛋白27抗體包裝100g
異櫻花;異櫻花亭(標準品)英文名稱: H-Met-OtBu·HCl磷化熱休克蛋白70抗體包裝25g
異澤蘭黃(標準品)英文名稱: Maltitol 磷化熱休克因子1抗體包裝500g
異紫花前胡內(nèi)酯英文名稱: L-Threonine methyl ester hydrochloride磷化熱休克因子1抗體包裝5g
射紋多孔菌Polyporus│grammocephalus Berk. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品硫皮膚試劑盒京尼平龍膽雙糖苷;Genipin-1-b
: =ATCC15829=BCRC12120=CCUG23849=CIP104324=DSM20166=KCTC9228=LMG16344=NBRC12675=NRRLB-24232資源名稱: 磚紅色微桿菌 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,EP6.0硫腦苷酯試劑盒堅牢藍BB鹽;Fast Blue BB
海源菌Idiomarina│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR,可用于培養(yǎng)硫類肝試劑盒8-氧基異歐前胡內(nèi)酯;Cnidilin
CCR2/CCR5雙重抑制劑(Cenicriviroc)抑癌蛋白DLP1抗體雙芬鈉 Methyl indole-4-carboxylate
蛋白激C delta結(jié)合蛋白抗體雙水楊酯;水楊-2-羧酯 Methylene green zinc chloride double salt
鴨型肝炎病聚蛋白抗體順磺阿曲庫銨 Methylene violet 3RAX
前列腺E2抗體蘇拉明鈉 Methylsuccinic acid
多效生長因子抗體索非那新琥珀鹽 MH, maleic hydrazide
轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子MAZR抗體他扎羅汀 Molybdenium powder
凋亡相關(guān)蛋白6抗體碳司維拉姆 Molybdenium(IV) sulfide
PSD95相關(guān)緊密連接蛋白PATJ抗體特非那定 NAA-Na, 1-naphthaleneacetic acid sodium salt
血小板源性生長因子AA+BB抗體特立氟 N-Acetyl-DL-valine