詳細介紹
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
AST-1306 TsOH | 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg | 1~3天 |
公司產品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%,;優(yōu)質胎牛血清,,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,,現用現配,,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度,。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
AST-1306TsOH是不可逆的EGFR和ErbB2抑制劑,,IC50分別為0.5nM和3nM,,對突變型EGFR T790M/L858R同樣有抑制性,對ErbB家族的抑制性比其它激酶強3000倍,。 注:本品僅可用于科研實驗,,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1050500-29-2 別名:AST-1306 (p-Toluenesulfonic acid);AST1306 (p-Toluenesulfonic acid);AST 1306 (p-Toluenesulfonic acid) 純度:98.85% 分子量:621.08 儲存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水),。
2) 對于懸浮細胞,,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,,加入細胞培養(yǎng)液,,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內,,500-1000g離心5min收集細胞,。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細胞,,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細胞,,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測),。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,,正常細胞組可作為熒光補償調節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),,FITC為橫坐標,PI為縱坐標,。Annexin V-FITC和PI聯合使用時,,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光,。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,,細胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán)。
枯草芽孢桿菌枯草亞種人腫瘤壞死因子相關弱凋亡誘導因子Bacillus thuringiensis小鼠N端前腦鈉(NT-proBNP)
白僵菌人IPO-38蛋白Bacillus thuringiensis小鼠纖溶抗纖溶復合物(PAP)
枯草芽孢桿菌人切除修復交叉互補基因1Bacillus thuringiensis小鼠纖溶抗纖溶復合物(PAP)
銅綠假單胞菌人羰基化蛋白Bacillus thuringiensis小鼠凝血抗凝血復合物(TAT)
綠色木霉人磷化核因子κB抑制蛋白α(IKKα human ELISA kit)Bacillus thuringiensis小鼠凝血抗凝血復合物(TAT)
釀酒酵母人樁蛋白Bacillus thuringiensis小鼠抗凝血受體(ATR)
彎孢人小表皮粘蛋白Bacillus thuringiensis小鼠抗凝血受體(ATR)
大腸埃希菌人類似60S核糖體蛋白L21Bacillus thuringiensis小鼠凝血受體(TR)
紫色鏈霉菌人類粘蛋白2Bacillus thuringiensis小鼠凝血受體(TR)
平滑假絲酵母人MAX二聚化蛋白1Bacillus thuringiensis小鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)
硬皮馬勃屬人水閘蛋白14Bacillus thuringiensis小鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)
銹色野野村氏菌人可溶性半乳糖苷結合凝集3Bacillus thuringiensis小鼠磷肌3激(PI3K)
乳粉 沙門氏菌(陰性)人主要穹窿蛋白Bacillus thuringiensis小鼠磷肌3激(PI3K)
小卷霉人泛蛋白DBacillus thuringiensis小鼠β內啡肽(β-EP)
露濕漆斑菌人toll樣受體2Bacillus thuringiensis小鼠β內啡肽(β-EP)
米根霉年2型血色沉著癥/幼年型血色病相關蛋白2Bacillus thuringiensis小鼠缺血修飾白蛋白(IMA)
少突膠質細胞轉錄因子2抗體豹斑毒鵝膏菌正常大鼠腎細胞
增食欲B/欲激B亞巴馬全緣孔菌洲綠猴腎細胞
寡腺苷合成-1斑點嗜藍孢孔菌人APP-PS1雙基因轉染CHO細胞株
陽離子轉運器1抗體小果雞樅小鼠睪丸上皮細胞15P-1(干細胞庫保藏)
EGFR和ErbB2抑制劑(AST-1306 TsOH)銹赤蠟黃鏈霉 青霉鏈霉兩性霉B溶液
紫紅曲霉 柳穿魚黃
枯草芽孢桿 戈米辛J
迂回殼囊孢 青霉鏈霉溶液
草假單胞 青霉
大腸埃希氏 偽綿馬
鄉(xiāng)間假絲酵母 青霉鈉
綠色產色鏈霉 制霉
短波單胞屬 新霉硫酸鹽
叢赤殼 6'-O-β-D-葡萄糖基龍膽苦苷
球孢白僵 寡霉
氈毛青霉 仙鶴草D
凝結芽孢桿
巨大芽胞桿 那霉硫酸鹽
釀酒酵母 慶大霉硫酸鹽